植物根系活力的测定（α萘胺法）及过氧化物酶活性的测定（.docVIP

植物根系活力的测定（α─萘胺α─萘胺植物的根系能氧化吸附在根表面的α─萘胺，生成红色的α—羟基—1—萘胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色，其反应如下： 水培水稻等植物根系 1.2 仪器设备：分光光度计；电子分析天平；振荡器；刻度试管（或普通试管）；试管架；移液管（10ml、2ml、1ml）；移液管架；吸水纸；洗耳球；黑纸；100ml三角瓶；100ml量筒。 1.3试剂及配制： 50μg/ml α－萘胺母液的配制：精确称取0.1000g分析纯α－萘胺溶于约50ml蒸馏水中（微微加热），冷却后定容至100ml，即为1000μg/mlα－萘胺溶液，保存于棕色瓶中，置低温黑暗处保存。使用前吸取1000μg/ml α－萘胺溶液50ml加蒸馏水稀释至1000ml即为50μg/mlα－萘胺母液。 1％对氨基苯磺酸溶液配制：称取1g对氨基苯磺酸溶于100ml 30％乙酸中。 100μg/ml亚硝酸钠溶液配制：称取0.1g亚硝酸钠溶于1000ml蒸馏水中。 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.0） 2.2处理方法 2.2.1α—萘胺氧化法测定根系活力 2.2.1.1定量测定： 取50μg/ml的α—萘胺溶液和0.1mol/l pH7.0的磷酸缓冲液各25ml，置于三角瓶混匀。称取1-2g根系浸入三角瓶；同样，不放根系做一对照瓶。5min后分别从两瓶中各取2ml溶液，加入10ml蒸馏水，再在其中加入1%对氨基苯磺酸溶液1ml和亚硝酸钠溶液1ml，在室温中放置5分钟，待混合液变成红色，再用蒸馏水定容到25ml。在25min后选用波长510nm，读取吸光度。 将两瓶于25℃恒温箱避光保温60min,各取2ml按上述步骤再次测定。 2.2.1.2绘制α—萘胺标准曲线： 取浓度为50μg/ml的α—萘胺溶液，配制成浓度为40、30、20、10、5、0μg/ml的系列溶液，各取2ml放入试管中，按上述步骤测吸光度。然后以A510为纵坐标，α—萘胺浓度为横坐标，绘制标准曲线。 根据第一次和第二次样液所测得的吸光度值，从标准曲线查出α－萘胺含量，按下公式计算α－萘胺氧化值。 2.2.1.3计算： 取1 g鲜根，振荡小时，以第一次取样时的α-萘胺浓度为A（是根上吸附的氧化铁氧化α-萘胺后剩余的α-萘胺浓度，亦即酶促反应前α-萘胺的起始浓度），第二次取样时的α-萘胺浓度为B（即根在酶促反应3小时后剩余的α-萘胺浓度）。所以A-B为根的α-萘胺氧化量，C为空白试验时α-萘胺减少的浓度（即α-萘胺在振荡小时的自身氧化量）。由于所用溶液是等体积的0μg/mlα-萘胺溶液和磷酸缓冲溶液，共50 mL，所以每mLα-萘胺含量为2 μg，X为稀释液体积（mL），由于取样为2 mL，酶促反应是在48 mL的α-萘胺溶液中进行的，其计算公式如下： 其中：Y代表α-萘胺氧化量（μg/ g） /W××0.01×t 2.3数据资料的统计分析 2.3.1α—萘胺标准曲线 C 0 5 10 20 30 40 OD 0.000 0.094 0.213 0.431 0.595 0.825 1.3.2α—萘胺含量定量测定 OD值 0 10 20 实验组 0.520 0.418 0.385 对照组 0.590 0.490 0.383 1h后 实验组 0.426 0.346 0.292 对照组 0.498 0.483 0.385 m值 0.096 3.12 4.56 2.3.3过氧化物酶活性 OD 0.074 0.107 0.127 0.143 0.162 0.18 0.198 0.217 0.235 0.254 0.271 0.29 0.309 活性 0.062 0.089 0.106 0.119 0.135 0.150 0.165 0.181 0.196 0.212 0.226 0.242 0.258 【问题与讨论】 从实验的结果看，与理论预计的结果比较接近，可以说是比较成功的一次实验。 从α—萘胺含量定量测定的实验中，发现α—萘胺含量随着金属离子浓度的上升而上升。而理论则认为由于重金属离子的胁迫，植物不得不加强自身的呼吸作用而适应不良环境，因此，植物的呼吸作用势必加强从而过氧化物酶的作用也强，所以根对α—萘胺的氧化程度强，红色越明显，OD值也就大。但是从结果中未能观察出明显的线性比例关系，可能是由于实验采取的材料并不是严格在同一生态因子的环境下培养出来的，所以这种微小的差异就带来了实验结果的一些误差，这些问题都是要在以后的实验过程中要加以注意与改善的。 在过氧化物酶活性的测定的实验中，得到了一系列的取值，由于没有标准的对比，所以无法判断这次实验成功与否，但是如果仅从数据上来看，还是很好的符合了理论的结果，实验过程中应该不会存在太大的