白术内酯Ⅱ抗血小板作用及对血小板中蛋白激酶B磷酸化水平的影响.docVIP

白术内酯Ⅱ抗血小板作用及对血小板中蛋白激酶B磷酸化水平的影响 　　[摘要] 目的 观察白术内酯Ⅱ在体外对小鼠和人血小板活化的影响，并探讨其可能的分子机制。 方法 通过体外血小板聚集实验，采用比浊法测定不同浓度白术内酯Ⅱ对胶原诱发的小鼠及人血小板聚集的影响；通过血小板的铺展实验，检测白术内酯Ⅱ对人血小板铺展的作用；运用Western blot检测人血小板中蛋白激酶B（Akt473）的磷酸化水平。 结果 白术内酯Ⅱ可抑制胶原刺激下小鼠和人血小板的体外聚集（P 0.01）；经白术内酯Ⅱ处理后的人血小板铺展面积缩小（P 0.01）；人血小板中Akt473分子的磷酸化水平降低（P 0.01）。 结论 白术内酯Ⅱ对胶原诱导的小鼠和人血小板聚集能产生显著抑制作用，对人血小板的铺展也有抑制作用，其作用机制可能与血小板活化过程中的PI3K-Akt信号通路有关，提示白术内酯Ⅱ是一种有效的抗血小板化合物。 　　[关键词] 白术内酯Ⅱ；血小板；血栓；蛋白激酶B 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）04（b）-0018-05 　　[Abstract] Objective To observe the effects of the atractylenolide Ⅱ on mice and human platelet in vitro and discuss the underlying mechanism. Methods The effect of atractylenolide Ⅱ on mice and human platelet aggregation was induced by collagen in vitro. The effect of atractylenolide Ⅱ on human platelet was detected through the experiment of spreading. The phosphorylation level of Akt473 was detected by Western blot. Results Atractylenolide Ⅱ inhibited collagen-induced mice and human platelet aggregation （P 0.01）， and the spreading of human platelets on immobilized fibrinogen treaded with atractylenolide Ⅱ was diminished （P 0.01）. The level of phospho-Akt 473 was downregulated in the presence of atractylenolide Ⅱ （P 0.01）. Conclusion These results show that atractylenolide Ⅱ affected the platelet aggregation and spreading， and through regulating the PI3K-Akt signal way to inhibit platelet activities， atractylenolide Ⅱ is an effective antiplatelet compounds. 　　[Key words] Atractylenolide Ⅱ； Platelet； Thrombus； Akt473 　　动脉血栓形成是缺血性心、脑血管疾病和其他血栓栓塞性疾病发病的关键环节，血小板聚集是动脉血栓形成的重要诱因。能否有效控制病理状态下血小板的活化、聚集是防治血栓性疾病的关键，临床上抗血小板药物的使用目前是心脑血管疾病防治的重要手段，在心脑血管疾病的一级及二级预防中广泛应用。因此，对抗血小板治疗药物的探索一直是预防血栓及心血管疾病基础与临床研究的热点。对我国中医药的研究中发现，许多具有活血化瘀作用的中药都含有抑制血小板聚集的有效组分。天然中草药与目前已上市的西药和生物技术产品相比，具有安全性好，口服有效且来源广泛等优点[1-3]。因此，发展纯天然的抗血栓药物是目前研制新型抗血栓药物的有效途径。白术内酯Ⅱ属倍半萜类内酯化合物，是常用中药白术的主要化学成分之一。有研究发现白术内酯Ⅱ能阻滞黑色素瘤细胞的细胞周期及诱导细胞凋亡，但其对血小板的作用目前尚不清楚[4-5]。本实验拟观察白术内酯Ⅱ对血小板活性是否有抑制作用，并探讨其可能的分子机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 试剂与仪器 　　健康人单采血小板由上海