脑心通对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织Glu、NMDA―R1的影响.docVIP

脑心通对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织Glu、NMDA―R1的影响 　　摘要：目的：探讨脑心通对缺血再灌注导致神经细胞损伤的保护机制。方法：采用反复夹闭双侧颈总动脉结合鼠尾放血引起循环血量减少的方法制备拟脑缺血再灌注损伤大鼠模型，观察大鼠脑组织中Glu含量及大鼠海马组织NMDA-R1表达数量的变化。结果：脑心通组脑组织Glu含量明显降低（P?0.01，与模型组相比），并且大鼠脑海马组织内NMDA-R1表达明显减弱（P?0.01，与模型组相比）。结论：脑心通能够减少脑缺血再灌注损伤后Glu的合成或释放，抑制脑缺血再灌注损伤后NMDA-R的表达，防止Glu对NMDA-R的过度激活，从而起到防止兴奋性氨基酸毒性作用，保护神经细胞。 　　关键词：脑心通；缺血再灌注；谷氨酸 　　急性缺血性脑血管病是危害人类生命与健康的常见病和多发病之一，具有较高的致死率、致残率。近年来研究发现，脑缺血再灌注能引起一系列病理和生化的变化，主要表现为脑组织能量代谢障碍、兴奋性氨基酸（EAA）释放增加、细胞内Ca2+超载、自由基产生、细胞肿胀和凋亡等[1，2]。本实验用反复夹闭双侧颈总动脉结合鼠尾放血引起循环血量减少的方法制备拟脑缺血再灌注损伤大鼠模型，观察脑心通胶囊对大鼠脑组织中Glu含量及大鼠海马组织NMDA-R1表达数量的变化，探讨其治疗急性缺血性脑血管病的部分作用机制，为临床应用中药复方制剂提供实验依据。 　　1实验主要材料 　　选用四月龄无特定病原体（SPF）级SD大鼠50只，体重300±20g，雌雄各半，由甘肃中医学院SPF级实验动物中心提供。步长脑心通胶囊； Glu试剂盒；NMDA-R1免疫组化试剂盒。 　　2实验方法 　　2.1动物分组 　　选取大鼠50只，雌雄各半，随机分为空白组10只和假手术组10只，余30只造模。采用卒中指数评分标准选取20只造模成功的大鼠，随机分模型组10只、步长脑心通组10只。 　　2.2模型制备 　　采用由Nordtrom建立的2VO阻断缺血模型，加鼠尾放血改良后用于本实验模型制备[3]。要求术前禁食水。用水合氯醛腹腔内注射麻醉大鼠，仰卧固定，被皮，消毒，沿颈正中线皮肤切口，再用神经剥离器分离与颈总动脉伴行的迷走神经，完全暴露出双侧颈总动脉，用无创动脉夹闭颈总动脉，阻断血流10min，然后恢复血流，间隔10min，共2次。阻断的同时，剪鼠尾放血，以造成全脑低灌注，放血后热凝止血，造成急性脑缺血再灌注损伤模型。 　　假手术组：麻醉及手术和实验过程与造模组操作过程大致相同，但不阻断颈总动脉亦不放血。 　　2.3评价造模成功的标准 　　采用卒中指数评分标准[4]。卒中指数评分如下：毛发脏乱、颤抖各1分，运动减少或迟钝1分，耳触觉迟钝为3分，眼固定状睁开为3分，后肢外展呈八字为3分，上睑下垂为1分，转圈为3分，惊厥或爆发运动为3分，极度虚弱为6分。总分25分，?10分明显有损伤。选取卒中指数?10分的动物为造模成功的动物。 　　2.4 Glu、NMDA-R1的检测 　　采用比色法检测脑组织中Glu的含量。采用免疫组织化学法检测脑海马组织内NMDA-R1免疫反应细胞的表达。免疫组化SABC染色法，DAB显色，苏木素轻度复染，脱水，透明，封片。切片中免疫组化显色的神经细胞定量，采用显微镜计数法。 　　2.5统计学处理 　　数据采用SPSS15.0统计软件处理，结果以均数±标准差（X±s）表示，多组均数间均采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）。 　　3实验结果 　　3.1脑心通对脑缺血再灌注损伤大鼠卒中指数评分的影响 　　表1显示大鼠的卒中指数评分步长脑心通组比模型组低，且随时间推移呈递减趋势。第1天，步长脑心通组与模型组比较无统计学意义，提示脑缺血再灌注损伤模型制备成功，并且各用药组动物选取无差异；第6天，步长脑心通组与模型组比较无统计学意义；第12天，步长脑心通组与模型组比较组比较有显著性差异，说明步长脑心通都能显著改善模型大鼠神经行为症状和体征，有较好疗效，说明中药治疗作用起效慢。 　　3.2脑心通对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织Glu含量的影响 　　脑缺血再灌注后，与空白组、假手术组相比，模型组大鼠脑组织Glu含量明显升高，说明模型组发生了明显的兴奋性氨基酸毒性作用；与模型组比较，脑心通组较模型组Glu含量均下降，有显著差异，说明脑心通可有效缓解脑缺血再灌注损伤后的EAA毒性作用。见表2。 　　3.3脑心通对脑缺血再灌注损伤大鼠脑海马组织NMDA-R1表达数量的影响 　　脑缺血再灌注后，与空白组、假手术组相比，模型组大鼠脑海马组织内NMDA-R1的表达数量均明显低于空白组，说明脑组织内NMDA-R1在脑缺血再灌注过程中被激活，导致受体门控通道开放，造成神经细胞的