灯盏花素脂质体前体抗脑缺血再灌注损伤药效学的研究.pfg.docVIP

?中文论著摘要? 灯盏花素脂质体前体抗脑缺血再灌注损伤药效学研究 刖  声 缺血再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉａ ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，ＩＲ）损伤是指各种原因造成的局部组织器官 的缺血缺氧，使组织细胞发生缺血性损伤，在一定条件下恢复血液再灌注后，细 胞功能代谢障碍及结构破坏反而加重的现象。缺血再灌注可挽救濒临死亡的细胞， 也可加重细胞损伤，导致细胞死亡。缺血性脑血管病已经成为人类致死、致残的 最主要疾病之一。 灯盏花素（ｂｒｅｖｉｓｃａｐｉｎｅ）是从菊科短亭飞蓬属植物短亭飞蓬（Ｅｒｉｇｅｒｏｎ  ｂｒｅｖｉｓｃａｐｕｓ Ｖａｎｔ．）中提取出来的黄酮类有效成份，是灯盏乙素为主和少量甲素的混合物，其 中灯盏乙素含量占９５％以上。灯盏花素药理活性广泛，具有保护脑缺血区神经元， 拮抗氧自由基，减轻脑水肿和炎症反应，减少脑组织缺血及再灌注损害，保护脑 组织作用。但是其口服生物利用度低。临床上主要用于治疗脑梗死、冠心病、心 绞痛等。 脂质体是一种定向药物载体，属于靶向给药系统的一种新剂型，具有增加药 物溶解度、增强药物的靶向性及降低毒性等优点。脂质体前体是指经喷雾干燥、 冻干后以固态形式存在的脂质体分散系，在临用前加入分散介质即可再分散形成 脂质体。采用脂质体技术制备的灯盏花素脂质体前体可以显著提高其口服生物利 用度，有可能提高疗效。本研究拟观察灯盏花素脂质体前体对大鼠脑缺血再灌注 损伤的保护作用，并对灯盏花素脂质体前体进行安全性评价。 实验方法 １．ＳＤ大鼠脑缺血再灌注模型制备和神经评分 参照Ｌｏｎｇａ线栓法制作大脑中动脉阻塞再灌注动物模型，大鼠清醒之后按 Ｌｏｎｇａ４分法进行神经功能评分，１．３分作为缺血再灌注成功样本入选。 ２．脑组织ＴＴＣ染色 再灌注后４ ｈ断头取脑，全脑冠状切成５片，３７。Ｃ水浴ＴＴＣ染色，多聚甲醛 固定，拍照。 ３．用专业图像分析软件ｉｐｐ６．０计算脑梗死面积 ４．脑含水量测定 按干湿重法，脑组织含水量（％）＝（脑湿重一脑干重）／脑湿重ｘ１００％。 ５．采用线栓法制备大鼠下腔静脉血栓模型 水合氯醛麻醉大鼠，开腹分离下腔静脉，与左肾静脉下方结扎下腔静脉。 ’ ６．采用ＦｅＣｌ３建立大鼠颈总动脉血栓模型 水合氯醛麻醉大鼠，分离右侧颈总动脉２ｃｍ，将吸有２０ｕｌ ＦｅＣｌ３溶液的小片滤 纸敷于颈总动脉上３０ｍｉｎ。 ７．采用毛细管法测定小鼠凝血时间 ８．急性毒性实验 首先进行ＬＤ５０测定实验。但是ＬＤ５０无法测出，接下来进行最大给药量实验。 ９．统计学处理 所有数据以平均值士标准差表示，采用单因素方差分析对组间差异进行统计学 分析，Ｐ＜Ｏ．０５被认为有统计学差异。 实验结果 １．脑组织梗死面积检测结果 与模型组比较，ＰＳ剂量依赖性降低缺血再灌注后脑组织梗死面积，从模型组 ０．２３９士０．０５１分别降至Ｏ．１４１＋０．０３６，和０．１１３＋０．０２９（尸＜Ｏ．０５）。与Ｂｒｅ组比较， ＰＳ中剂量组显著降低了脑梗死面积，从Ｂｒｅ组０．１８５士０．００８降至ＰＳ中剂量组 ０．１４１士０．０３６（尸＜０．０５）。 ２．脑含水量测定结果 与模型组比较，ＰＳ能剂量依赖性降低再灌注后脑组织水肿程度，从模型组 ７９．７２＋０．４６分别降至７８．６８＋０．４６和７８．３９＋０．１９（尸＜０．０５）。 ２ ３．大鼠下腔静脉血栓形成实验结果 与模型组比较，ＰＳ能剂量依赖性降低血栓重量，血栓湿重从模型组 ２７．３４士１  ８．０６分别降至２３．９２土２０．０９和７．４６１６．２０（尸＜０．０１）；干重从模型组８．４２＿４：５．８５ 分别降至７．４９士６．３０和２．７４士１．８２（Ｐ＜０．０１）。ＰＳ中剂量组与Ｂｒｅ组比较没有显著性 差异。 ４．大鼠颈动脉血栓溶栓实验结果 与模型组比较，ＰＳ能剂量依赖性降低血栓重量，从模型组３．００士１．４３，分别降 至２．３８士１．０５和１．８９士０．８６（Ｐ＜Ｏ．０５）。 ５．小鼠凝血时间测定实验结果 与模型组比较给药组凝血时间显著延长，从模型组５９．５士１１．３分别延长至 ９３．５士１８．１，１１５．８士１８．６和１１８．０士１７．８（尸＜０．０１）。与Ｂｒｅ组比较，ＰＳ中剂量显 著延长了凝血时间（ＰＳ中剂量１ １５．８士１８．６，ｎ＝２０倦Ｂｒｅ ９３．５士１８．１，ｎ＝２０ Ｐ＜０．０１）。 ６．急性毒性实验结果 ＬＤｓｏ测定预试实验中ＰＳ高剂量组（１８０００ｍｇ／ｋｇ），ＰＳ中剂量组（９０００ｍｇ／ｋｇ）， ＰＳ低剂量组（４５００ｍｇ／ｋｇ）小鼠均没有出现死亡，ＬＤｓｏ未能测出。在随后最大给 药量实验中，按１８０００ｍｇ／ｋｇ剂量一天灌胃两次（相当于临床剂量２０００倍），１４ 天内小鼠行为无异常，没有死亡，给药后１４天进行大体解剖未见内脏器官异常。 结论 灯盏花素脂质体前体（ＰＳ）能显著降低