合成的哌啶并噻吩类化合物抑制肺癌细胞生长初步研究.docVIP

合成的哌啶并噻吩类化合物抑制肺癌细胞生长初步研究 　　摘 要：为了发现新的可用于肺癌治疗的小分子药物，从实验室现有的小分子化合物库中.选取13个未见报道的新型哌啶并噻吩类化合物，对其抑制肺癌A549细胞生长的作用进行初步评价 通过体外培养A549细胞.应用WST-】法检测小分子化合物（终浓度为10 μmol/L）处理后细胞存活率的变化，发现化合物11（噻吩并【2.3一c]哌啶-3-甲酰胺一2一（3一甲氧基一萘一2一羰基）一氨基]-6-苄基一.盐酸盐）能显著抑制A549细胞的生长，抑制率可达到（71.34+0，96）%。对小分子化合物结构与活性关系的分析发现苯并结构可能是增强化合物对A549细胞生长的抑制作用的关键结构基团。随后.进一步分析了化合物11（终浓度分别为I、2.5、5、10μmol/L）对A549细胞和正常人胚肺成纤维MRC-5细胞生长的抑制作用 结果表明，随着该化合物浓度增加，对A549细胞生长的抑制率逐渐增大，用GraphPad Prism软件计算出该化合物的IC50为2.407μmo1/L；而该化合物对MRC-5细胞生长的抑制率显著低于对A549细胞生长的抑制率.当作用终浓度为10 μmol/L时，其对MRC-5细胞生长的抑制率也只有30.41%。这些研究结果初步显示化合物11是一种新的较为理想的治疗肺癌药物先导化合物的候选分子 　　关键词：肺癌；A 549细胞：MRC-5细胞；细胞生长；哌啶并噻吩：结构活性关系 　　中图分类号：Q279 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007-7847（2014）05-0382-05 　　肺癌是世界范围内发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一。近年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性肺癌发病率和死亡率占女性所有恶性肿瘤的第二位[1]。肺癌的治疗方法主要有手术治疗、放射治疗、药物治疗、靶向治疗、综合治疗等，药物治疗及靶向治疗在其中占据了重要的地位[2]。目前，临床上常用的治疗肺癌的药物有贝伐单抗、西妥昔单抗、长春新碱等，虽然这些药物对肺癌有一定的疗效，但也存在着很大的毒副作用及机体对药物的极大的耐药性问题，因此，开发疗效显著、靶向性强、毒剐作用小的新型治疗药物显得尤为重要[3]。 　　化学合成的有机小分子是一种相对分子质量小、容易进入细胞、可以与其中的蛋白质分子结合并影响蛋白活性的一种化合物。在抗肿瘤药物的筛选中，这种小分子化合物也得到广泛的应用，筛选有活性的小分子化合物是其中的第一步。一口.筛选到活性化合物，该化合物就被视为可能的药物先导化合物，后续可进行结构修饰、药理学研究、药代动力学分析等药物开发的相关研究工作。、此外，就算筛到的活性化合物不适合作为药物开发对象，进一步寻找该化合物的作用靶点及作用机制，电可发现一些与肿瘤发生发展相关的重要的新的基因，从而为药物研发提供新的靶点，因此也是具有重要意义的[4，5]。在20世纪八九十年代，快速合成结构多样的有机小分子的技术发腱成熟，随后商业化的小分子化合物大量出现，为抗肿瘤药物筛选及肿瘤发生机制的研究提供了丰富的资源[6]。 　　在医药的研究发展过程中，含氮杂环化合物因其具有独特的生物活性、低毒性等，常被作为医药创制的基本结构单元[7-9]1。为了寻找高活性的新型化合物，本研究从实验室现有的小分子化合物库中选取13个含有哌啶并噻吩为母核，成氯盐，目前国内外文献未见报道的新型化合物，在体外培养肺癌A549细胞中，研究其对细胞生长的抑制作用；并分析了化合物结构与活性之问可能存在的关系。对活性最高（对A549细胞生长的抑制率最高）的化合物进行了抑制A549细胞生长的浓度依赖效应分析及对正常人胚肺成纤维MRC-5细胞的生长抑制作用研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　人肺癌细胞系A549由昆明理工大学医学院张继红老师馈赠，正常人胚肺成纤维细胞系MRC-5购自中国科学院昆明动物研究所细胞胞库，小分子化合物购自Life Chemicals。研究中所用主要试剂包括：改良型RPMI-1640培养荩fIIv一clone）、DMEM培养基（Hyclone）、胎牛血清（Scien―Cell）、特级胎牛血清（Gibco）、青链霉素混合液液（So一larbio）、胰蛋白酶-EDTA消化液（Solarbio）、二甲基亚砜（DMSO，Solarbio）。WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（碧云天生物技术研究所）。 　　1.2 细胞培养 　　从液氮罐中取出细胞，复苏后置于6 cm直径的细胞培养皿中，放在37 ℃、5% C02条件下的细胞培养箱（Thermo）中培养。A549细胞完个培养基包括改良型RPMI-1640培养基、10%的胎牛血清（Sci