（生物化学教学课件）第12章 DNA的生物合成(6-1, LMJ2015).pptVIP

gin * 两端单链DNA母链不填补成双链，就会被核内DNase酶解，造成子代染色体末端缩短。 某些低等生物出现少数特例，经多次复制后的染色体越来越短，造成末端相邻的一些重要基因丢失、遗传信息完整性破坏。 * * 端粒 染色体 端粒(telomere) 是指真核生物染色体末端DNA 与它的结合蛋白紧密结合而形成的特殊结构。 端粒的功能： ☆ 稳定染色体末端结构； ☆ 防止染色体间末端连接； ☆ 补偿DNA 5′末端在清除RNA引物后造成的空缺。 * * 端粒的结构特点 TTTTGGGGTTTTGGGG… 端粒的共同结构是富含(TmGn)x重复序列，重复的次数由几十到数千不等，并能反折成二级结构。 水解引物后每个染色体的3’末端比5’末端长,伸出约12～16个单核苷酸链，这一特殊结构可募集一种称为端粒酶(telomerase)的特殊酶。 P5’ HO3’ 3’ O P5’ 5’P 3’ OH * * 端粒酶(telomerase) 人端粒酶组成 (1997,成功克隆) 功能特点 由RNA和蛋白质组成，是一种特殊的反转录酶。 ①端粒酶RNA(hTR, 能与染色体的3’ssDNA互补) ②端粒酶协同蛋白1(hTP1) ③端粒酶反转录酶(hTRT) ☆ 能以自己的RNA组分作为模板， 以染色体3’端的ssDNA作引物, 　 延伸其底物DNA的3’端。 * * 端粒酶催化作用的爬行模型 G-C配对回折 * * -OH -OH -OH 正常细胞： 细胞分裂 衰老死亡 细胞年轻化 细胞分裂 导入端粒酶 抗衰老 端粒、端粒酶与细胞衰老 * * 端粒、端粒酶与肿瘤 但有某些肿瘤形成时可产生端粒缺失、融合、或缩短等现象。 ☆癌细胞可通过某些机制启动端粒酶基因的表达，使染色体端粒稳定地维持一定的长度，使癌细胞得以持续增殖、转移并获得永生。 大多数增殖活跃的肿瘤细胞（约85%）端粒酶活性增高。 ☆端粒酶可作为为病变组织良恶性鉴别指标，及抗癌治疗的靶位点。 * * * * 真核与原核生物复制的主要区别 * * 反转录和其他的复制方式 第四节 Reverse Transcription and Other DNA Replication Ways * * 学习要求： 掌握反转录概念、作用特点、作用过程及生物学意义。了解滚环复制和D环复制。 逆转录酶(reverse transcriptase) RNA病毒逆转录(reverse transcription)现象 逆转录酶 又称反转录酶，为依赖RNA的DNA聚合酶(RNA dependent DNA polymerase, RDDP)。 一、反转录酶和反转录 1.逆转录酶活性：以RNA为模板(tRNA为引物)合成cDNA 2.RNase H活性：水解RNA-DNA杂合分子中的RNA 3.DNA-pol活性：以DNA为模板合成cDNA(第二条链) 逆转录酶没有3′→5′外切酶活性,无校对功能。 * * 复制引物：病毒自身的tRNA的3′-OH 。 图12-18 反转录酶催化RNA转变为双链cDNA的途径 AAnA TTnT 5′ 5′ mRNA 反转录酶 mRNA cDNA 3′ TTnT AAnA Rnase H TTnT 3′ DNA poly I cDNA 核酸酶S1 双链cDNA 3′ 5′ 3′ 5′ 5′ B．试管内合成cDNA * * 反转录病毒细胞内的逆转录过程： 受体:CD4 辅受体：CCR5/RANTES 或 CXCR4/SDF-1 gp120 二、逆转录研究的意义 （1）扩展了中心法则；表明RNA可同时兼有遗传信 息传代与表达的功能。 （2）对反转录病毒的研究，有助于肿瘤和艾滋等疾 病发病机制和诊治的研究。 （3）cDNA 法、反转录病毒载体已成为基因工程和 基因治疗的重要工具。 1964~1970, Baltimore、Temin和Dulbecco在RSV和MLV研究，发现反转录酶、肿瘤病毒和细胞遗传物质间的相互作用，获1975诺贝尔生理/医学奖。 * * AZT(3’叠氮-2’, 3’双脱氧胸腺核苷)是已用于艾滋病临床治疗的抑制反转录酶的药物 AZT经T淋巴细胞吸收后转变为AZT三磷酸酯。 * * PPP- 一方面AZT三磷酸酯与HIV反转录酶有高亲和力，竞争性抑制了酶对dNTP的结合； 另一方面AZT可被加接到合成中的DNA链3′端，但AZT没有3′-OH，故病毒DNA合成被