骨髓单个核细胞抗体及外周血B淋巴细胞与IRP的相关性研究.docVIP

骨髓单个核细胞抗体及外周血B淋巴细胞与IRP的相关性研究 　　摘要：采用流式细胞术双标法检测拟诊免疫相关性全血细胞减少症患者（A组）、非免疫相关性恶性血液病患者（B组）及正常人（正常对照组）的骨髓单个核细胞结合的自身抗体.同时检测B组、确诊免疫相关性全血细胞减少症（C组）及正常对照组外周血B淋巴细胞及CD5+B淋巴细胞比率；A组中16例骨髓造血细胞自身抗体阳性，阳性率88.88%；B组1例骨髓造血细胞自身抗体阳性，阳性率9.09%。C组外周血B淋巴细胞CD5+B淋巴细胞比率显著高于B组及正常对照（P均0.05），而正常对照组外周血B淋巴细胞、CD5+B淋巴细胞显著高于B组（P均0.05 ）；TRP患者骨髓单个核细胞自身抗体表达显著增高，B淋巴细胞总数及CD5+B淋巴细胞数量显著增高可能是IRP发病的重要因素之一；利用流式细胞术检测骨髓造血细胞自身抗体及B淋巴细胞数可以为IRP提供科学可靠的依据.优于骨髓Coomb’s实验 　　关键词：全血细胞减少：免疫相关性；自身抗体；流式细胞术：B淋巴细胞：CD5+B淋巴细胞 　　中图分类号：R446.11+3 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007-7847（2014）05-0418-05 　　免疫相关性全血细胞减少症（immuno-relatedpancytopenia，IRP）是由于T淋巴细胞调控失衡导致B淋巴细胞数量、亚群、功能异常，进而B淋巴细胞产生自身抗体，最终引起血细胞减少症候群。作为临床多个学科易见的疾病，其与再生障碍性贫血（aplastic anemla，AA）、骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndromes，MDS）、阵发性血红蛋白尿（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria， PNH）、慢性病性贫血（anef11ia of chronic disease，ACD）等骨髓衰竭性疾病不易区分，容易混淆，危害性大，治疗难以着手，是困扰临床医师的一大难题。 　　自2001年IRP由邵综鸿等提出以来，对于IRP的实验室诊断研究尤为引起关注。目前IRP患者自身抗体的实验室检测手段有骨髓单个核细胞Coambs试验、骨髓细胞抗体放散试验、流式细胞术双标法，其中敏感性最高的属流式细胞术双标法。近期有研究提出，IRP患者自身抗体的产生可能与骨髓B淋巴细胞及其亚群数量异常有关。本文在证实流式细胞术双标法检测患者自身抗体敏感性的同时，摸索最佳检测条件以便日后开展于临床检验。并利用流式细胞术检测正常人、非免疫系统的恶性血液病患者及IRP患者外周血B淋巴细胞及CD5+B淋巴细胞比率，比较三类患者的差异，为IRP的鉴别诊断提供更多的鉴别参考，而且还有利于制定更有效的治疗策略。 　　1 　　实验部分 　　1.1 材料 　　1.1.1 病例 　　29例患者均取自于云南省第一人民医院血液科初治住院病人，其中18例按照文献[4]标准拟诊为IRP患者，男11例、女7例，年龄17―56岁，即未明确诊断组（A组）；另11例为明确诊断非免疫相关陛恶性m液病组（B组），男5例、女6例，年龄17-48岁，分别诊断为再生障碍性贫血3例、阵发性睡眠性血红蛋白尿4例及骨髓曾生异常综合征4例，均符合国内诊断标准；A组经确诊为IRP后设为C组；另设正常对照22例，其中男11例、女11例，年龄18～56岁。 　　l.1.2 试剂与仪器 　　异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鼠抗人IgG、IgM、IgA、CD5、CD3单克隆抗体，藻红蛋白（PE））标记的鼠抗人CD34、CD15、CD19、CD235、CD4单克隆抗体以及它们各自的同型对照均购自于美国Beckman Coulter公司，流式细胞仪型号FM500MPL为Beckman Coulter公司产品。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 Facs双标法检测骨髓造血细胞自身抗体 　　取9根检测管分成3组均加入肝素抗凝的骨髓液100μL，3组分别加入PE荧光标记的鼠抗人CD15或PE标记的鼠抗人CD34、PE标记的鼠抗人Glyco-A单克隆抗体20 μL，每组内再分别加入FITC标记的鼠抗人IgG、IgM、IgA。常温避光孵育20 min后，加入红细胞裂解液，混匀后室温孵育10 min，最后加入适量PBS液混匀。同型对照加入鼠抗人IgGl单克隆抗体-PE、鼠抗人IgG2单克隆抗体-FITC各20 μL，按同样方法操作。处理后标本上流式细胞仪测定骨髓单个核细胞（CDl5+细胞、CD34+细胞、GlycoA+细胞）表面自身抗体IgG 、lgM、IgA的结合率。每个样品收集15 000个细胞。 　　1.2.2 检测外周血总B淋巴细胞、CD5+B淋巴细胞比率 　　取1根检测管，加入20