高效液相色谱法测定芬戈莫德胶囊的溶出度.docVIP

高效液相色谱法测定芬戈莫德胶囊的溶出度 　　【摘 要】目的：建立测定芬戈莫德胶囊溶出度的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent ZORBAX-C18，流动相为0.1mol/L的高氯酸钠溶液（用高氯酸调节pH3.0）-乙腈（35∶65，V/V），检测波长为215nm，进样量为50μl，柱温为30 ℃，流速为1.5ml/min。溶出度测定以pH6.8磷酸盐缓冲液（含0.05%十二烷基硫酸钠）500 ml为溶出介质，转速为100r/min，30min取样。结果：芬戈莫德检测质量浓度在0.2～1.2μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.9999）；精密度、稳定性试验的RSD≤0.6%；平均回收率为99.7%，RSD为0.33%（n=9）。结论：该方法快速、简便、准确，可用于芬戈莫德胶囊的溶出度测定。 　　【关键词】高效液相色谱法；芬戈莫德胶囊；溶出度 　　芬戈莫德鞘氨醇-1-磷酸受体调节剂，于2010年9月美国食品药品管理局（FDA）批准诺华公司的芬戈莫德上市，目前国内无该产品上市。芬戈莫德为近十数年来首个作为一线口服药物用于治疗复发型多发性硬化症（MS）的药物[1]。开发芬戈莫德胶囊将会增加国内该类药物的品种，使临床有更多治疗选择。本品规格为0.5mg，参考美国FDA网站公布的芬戈莫德胶囊溶出度检查方法，选择更具区分能力的溶出介质对芬戈莫德胶囊进行了体外溶出研究，并建立了测定溶出度的反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，为评价该品种溶出度提供了一定参考价值。 　　1材料 　　1.1仪器 　　LC-2010型HPLC仪，包括紫外检测器，LC-solution色谱工作站等（日本岛津公司）；RC806溶出度检测仪（天大天发科技有限公司）；XP205电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。 　　1.2药品与试剂 　　芬戈莫德对照品（重庆华邦制药有限公司，批号：Fin；芬戈莫德胶囊（重庆华邦制药有限公司，规格：0.5mg，批号20150302；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为去离子水。 　　2方法与结果 　　2.1色谱条件 　　色谱柱：Agilent ZORBAX-C8（250×4.6mm，5μm）；流动相：0.1mol/L的高氯酸钠溶液（用高氯酸调节pH3.0）-乙腈（35∶65，V/V）；检测波长：215nm；柱温：30℃；流速：1.5ml/min；进样量：50μl。 　　2.2溶液的制备 　　2.2.1对照品溶液的制备：精密称取芬戈莫德对照品约25mg，置50ml棕色量瓶中，加50%乙腈30ml，超声使溶解，并用50%乙腈稀释到刻度，摇匀，精密量取5.0ml，置50ml棕色量瓶中，并用50%乙腈稀释到刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取对照品贮备溶液1.0 ml，置50ml棕色量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，超声，摇匀，作为对照品溶液。 　　2.2.2供试品溶液的制备取样品，按照溶出度测定法[《中国药典》2010 年版（二部）附录ⅩC第一法]，以pH6.8磷酸盐缓冲液（含0.05%十二烷基硫酸钠）500ml为溶出介质，转速为100r/min，温度37℃，依法操作，经时30min，取溶出液滤过，弃去初滤液3ml，取续滤液作为供试品溶液。 　　2.2.3空白对照溶液的制备称取空白辅料0.22g，按照“2.2.2”项下方法配制空白对照溶液。 　　2.3系统适用性试验 　　取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱。结果，芬戈莫德的保留时间约为5min，理论板数以芬戈莫德峰计算为6342。 　　2.4线性关系考察 　　取“2.2.1”项下对照品储备液，分别精密量取1ml、2ml、4ml、5ml和6ml，置25ml棕色量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，分别吸取50μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定。以芬戈莫德的质量浓度（x，μg/ml）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程y=374512x+892（r=0.9999）。结果表明，芬戈莫德检测质量浓度在0.2μg/ml～1.2μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。 　　2.5精密度试验 　　取“2.2.1”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次。结果，芬戈莫德面积的RSD=0.55%，表明仪器的精密度良好。 　　2.6稳定性试验 　　取“2.2.2”项下供试品溶液（批号适量，分别于放置0、4、8、16、24h时进样，按“2.3”项下色谱条件进样测定。结果，芬戈莫德的RSD=0.42%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。