《仪器分析教学课件》skja4.pptVIP

二、分子吸收光谱的分类和特征 紫外-可见 电子光谱 ?Ee =1 - 20 eV 红外 振动光谱 0.05-1 远红外 转动光谱 0.005-0.05 分子的电子光谱的特点： 在波长范围内按一定强度分布的谱带 —带光谱 波长位于紫外-可见区 可进行分子的定性和定量分析 可用于一些物理化学常数的测定（如平衡常数等） 仪器结构简单、价格便宜 应用范围广泛（无机离子、有机化合物、生物大分子分析等） 影响紫外-可见光谱的因素 共轭效应：?电子共轭体系增大，波长红移、吸收增强； 取代基影响：能够引起?电子永久性转移的取代基使波长红移（助色团）； 溶剂影响：一般情况下分子的激发态极性大于基态，因此溶剂极性增大有利于激发态稳定，能量降低，波长红移。 思考题 UV-VIS的理论灵敏度为 4.4 x 10-8 M，这一极限值能够从哪几个方面突破？请你提出有效的方法。 Development of nanoparticle labels to DNA and Protein-chips Chemiluminescence Sensors based on Enhanced emission on Rare-earth doped nanoparticles A=?HB（c- [B-]) +?B-[B-] = ?HBc+[B-] (?B-- ?HB) 同样由（2）得： A=?HB[HB]+ ?B-(c-[HB]) = ?B-c+[HB] (?HB- ?B-) [B-] = ?HB A -?HB c ?B-- 则：A=A HB +AB-=?HB[HB]+ ?B-[B-] (2) ?[HB]= ?B-c-A ?B-- ?HB (3) (4) 将（3）（4）代入（1）中： Ka = [H+] [B-] [HB] C=[HB]+[B-] Ka= [H+](A -?HB c) ?B-c-A A HB = ?HB c AB-= ?B-c 定义： ? A -AHB Ka= [H+] AB--A pKa=pH+lg A -AHB AB--A 三、测量误差 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 相对误差 T 只有当 则 测量误差最小，此时 - logT = log e = 0.434 = A 即吸光度为0.434时，浓度测量才具有最小相对误差。 四、紫外-可见分子吸收光谱的发展 1、光声光谱 激光光源 吸收池 光声传感器 记录装置 不仅可用于液体样品、也可用于固体样品 二、长光程紫外-可见分光光度计 激光光源 吸收池 记录装置 双 叉 光 纤 光导纤维传感器 第五节 荧光、磷光和化学发光分析法 （Fluorescence，phosphorescence and chemiluminescence analysis） 一、理论基础 1、分子发射光谱与分子能级结构 吸光 无辐射跃迁 系间跨越 单重线态 三重线态 荧光 磷光 E0 E1 E2 振动弛豫 （1）分子吸收光谱与分子荧光光谱 吸光 荧光 250 300 350 400 450 蒽乙醇溶液吸收和荧光光谱 相对强度 300 400 500 相对强度 荧光光谱与吸收光谱镜像对称 荧光光谱较吸收光谱简单 硫酸奎宁在稀硫酸中的荧光光谱与吸收光谱 （2）荧光量子产率（荧光效率） 发荧光的两个必要条件 分子能吸收光子而跃迁至激发态 激发态分子能以光的形式释放能量 荧光效率（?f）= 发出光子数 吸收光子数 如果一个分子将吸收的光子全部释放，则其量子产率为100%。 化合物 荧光效率 溶剂 荧光素 0.92 （0.1MNaOH） 曙红 0.19 （ 0.1MNaOH） 罗丹明B 0.97 （乙醇） 蒽 0.31 （己烷） 核黄素 0.26 （水，pH7） 菲 0.10 （乙醇） 萘 0.12 （乙醇） 酚 0.22 （水） 叶绿素 0.32 （苯） 某些化合物的荧光效率 （3）量子产率与分子结构 荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的?-电子共轭体系分子中，任何有利于提高?-电子共轭度的结构改变，都将提高荧光量子产率，或使荧光波长向长波长方向移动。 化合物 荧光效率 平均波长 苯 0.07 283 联苯 0.18 316 对联三苯 0.93 342 A C 0 ?1 ?1 + ?2 特别是存在非吸收线(或吸收很小,杂散光)和浓度较大时，I变的 很小， I i = 常数 ? A i I0 350 380 CrO4 2- Cr2O7 2- ?/nm A 0 3、吸收定律因化学反应而偏离 因解离等原因，被测物并不都以对特定频率辐射吸收有效的形态