耐热真菌产木聚糖酶的固体发酵条件.docVIP

耐热真菌产木聚糖酶的固体发酵条件 　　摘要：对嗜热真菌（Thermomyces lanuginosus）DSM 10635的固体培养基进行改良。设计的间歇通气的培养装置，简化掉补水操作后，简化了操作并降低了培养基成本，单瓶玉米芯干粉量为120 g/L，增大了培养瓶的利用率，第5天菌丝已基本充满整个培养体系，同时单批木聚糖酶活力最高为53 710 IU/g。 　　关键词：木聚糖酶；固体发酵；间歇通气；酶活力 　　中图分类号：TS201.3；TQ929文献标识码：A文章编号：0439-8114（2014）10-2395-03 　　Thermostable Xylanase Production with the Solid-state Fementation 　　CHEN Gong，ZHANG Wei，LI Si-jia，XIONG Hai-rong 　　（Engineering Research Centre of Bioresource in Southern China，College of Life Science，South-central University for Nationalities， 　　Wuhan 430074，China） 　　Abstract：Xylanase production with solid-state fementation of Thermomyces lanuginosus DSM 10635 was optimized. Under the water-saturated aeration device and the optimal culture media， the amount of corncob powder per bottle was 120 g/L. The utilization rate of culture bottle was increased. The mycelium filled up the whole culture system after 5 d and the xylanase productivity was up to 53 710 IU/g. 　　Key words： ylanases；solid state fermentation； intermittent ventilation； enzyme activity 　　基金项目：武汉市科技攻关项目（2013020501010180） 　　木聚糖酶（Xylanase，EC 3.2.1.8）是一种内切β-1，4-木聚糖苷酶。这种酶水解半纤维素中的木聚糖（Xylan）为可代谢的低分子寡聚木糖，对疏松原材料组织结构有重要意义[1-3]。嗜热真菌（Thermomyces lanuginosus）DSM 10635是一种耐热型菌株，所产的木聚糖酶1YNA具有良好的耐热性和热稳定性，能较好地应用于酶法水解木聚糖的高温处理过程[4，5]，能广泛应用于半纤维相关的燃料酒精工业、制浆造纸工业、饲料和食品工业。 　　目前，已有用基因工程的方法从Thermomyces lanuginosus DSM 10635中提取木聚糖酶基因片段导入毕赤酵母中高效表达和工业化生产的研究[6，7]。但未见有该菌株固体发酵工业化生产的报道。固体发酵有独特的优点，所使用的培养基简单便宜；原料不需糖化液化，处理简单；产物提取容易；固体发酵后的物料可直接作为产物；废水排放量大大减少；单位体积的培养基生产能力高于液体培养基；不易污染杂菌；设备简单等。试验借鉴已报道的最适pH，最适培养温度等条件[8，9]，从适应工业化生产的角度对Thermomyces lanuginosus DSM 10635的固体发酵条件进行改良。 　　1材料与方法 　　1.1材料与培养基 　　1.1.1原料与试剂 玉米芯，菌种为Thermomyces lanuginosus DSM 10635；3，5-二硝基水杨酸（DNS），标准木糖溶液，0.5%木聚糖-磷酸缓冲液（pH 6.5），柠檬酸-磷酸缓冲液（pH 6.5）。其他所用药品均为分析纯。 　　1.1.2培养基液体种子培养基：马铃薯液体培养基（PDA）；玉米芯固体培养基：将玉米芯粉碎成粉末，称120 g玉米芯干粉于1 L锥形瓶中，按料液比1∶3（g∶mL）添加培养液，在121 ℃下灭菌20 min，静置冷却。 　　1.2试验方法 　　1.2.1试验装置试验装置示意图如图1所示。 　　1.2.2培养基廉价化修改修改后的培养基各成分见表1。 　　1.2.3培养方法 　　1）菌种活化。挑取实验室保存的Thermomyces lanuginosus DSM 1