生物技术在天然药物研究中的应用讲解.ppt

四?植物细胞生物转化的调节 （一）植物细胞的影响 （二）外源底物的影响 （三）培养条件的影响 五?天然药物的植物细胞生物转化 （一）紫杉烷类化合物 sinenxan A 银杏悬浮细胞 C6羟基化；C9羟基化、甲酰化、选择性乙酰化； C10脱乙酰基、甲酰化；C14脱乙酰基 桔梗悬浮细胞 C10脱乙酰基 长春花悬浮细胞 10-deacetylbacctin Ⅲ bacctin Ⅲ 2-debenzoyltaxol 紫杉醇 桉树悬浮细胞 （二）鬼臼毒素类化合物 coniferyl alcohol (+)-pinoresinol (-)-matairesinol 4’-demethyl yatein yatein 6-methoxypodophyllotoxin ?-peltatin deoxypodophyllotoxin podophyllotoxin 4’-demethpodophyllum lignans 金亚麻悬浮细胞的生物转化 6-methoxypodophyllotoxin 7-hydroxy-matairesinol (-)-matairesinol ?-peltatin deoxypodophyllotoxin podophyllotoxin ?-peltatin-?-methylether （三）强心苷类 洋地黄毒苷的生物转化 ?-methyldigitoxin ?-methyldigoxin 蟾毒配基类的生物转化 长春花悬浮细胞培养对华蟾毒精的生物转化 3-OH、16-OH糖苷化 5位羟基化、1?位羟基化、3-OH脱氢反应 16位脱乙酰基反应 桔梗悬浮培养体系对华蟾毒精的生物转化 5位羟基化、16位脱乙酰基反应 华蟾毒精 （四）雷公藤内酯 雷公藤甲素 triptonide 雷公藤内酯三醇 12?,13?-dihydroxytriptonide 长春花悬浮细胞培养 生物转化研究进展 （一）新型生物催化剂的发现 生物转化反应多限在水解、氧化、还原，扩大转化反应类型 寻找热稳定性好、耐酸碱、耐高压的新型生物催化剂，拓宽应用范围 1997年欧盟启动“极端细胞工厂”的研究计划 中国将极端微生物列入2004年度“973”计划指南 （二）生物催化剂的定向改造 提高催化活性、耐酸碱性、热稳定性及稳定性，扩大底物选择性 涉及两种方法 定向进化：对靶基因进行任意突变或重组 合理设计：基于对蛋白质结构、功能和机制的详细了解，定点突变引入改变 （三）高通量筛选技术平台的建立 瓶颈： “生物催化剂库”中筛选目的催化剂 “类天然活性化合物库”中筛选高效、低毒的化合物 提高筛选效率、降低筛选成本 （四）生物转化机理研究 确定生物转化反应的关键酶及其基因序列 （五）组合生物转化研究 建立分子结构多样性的化合物库，为新药筛选提供资源 （六）非水相中的生物转化 天然活性化合物的溶解性 改变酶的底物特异性 非水相生物转化过程较容易放大 （三）鬼臼毒素 小檗科植物喜马拉雅鬼臼Podophyllum emodi和美洲鬼臼P. peltatum分离得到 1946年King和Sullivan证实鬼臼树脂和鬼臼毒素对动物实验癌细胞有破坏作用 副作用太大，影响临床应用 50年代开始对鬼臼毒素进行结构改造 鬼臼毒素，Podophyllotoxin 无色针状结晶 分子式C22H22O8 M 414 熔点112-117℃ 溶于乙醇、氯仿、丙酮、热苯、 冰醋酸 70年代出现2个半合成抗肿瘤药物 鬼臼乙叉苷，Etoposide，VP-16 鬼臼甲叉苷，Teniposide，VM-26 依托泊苷 特尼泊苷 1984和1992年，美国FDA批准依托泊苷和特尼泊苷上市 全球市场份额达40-100亿美金 两种抗癌药对淋巴肉瘤、膀胱癌、乳腺癌和儿童急性白血病有效 依托泊苷对小细胞肺癌、淋巴瘤疗效显著 对卵巢癌、乳腺癌、神经母细胞瘤也有效 毒副作用大、生物利用率低和难溶于水 NPF GL331 （四）蟾毒配基 蟾酥为两栖纲无尾目蟾蜍科中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor和黑眶蟾蜍 Bufo melanostictus Schneider耳后腺和皮肤腺分泌物的干燥物 复方和中成药配伍中具有重要地位 如“六神丸”和“症喉丸” 西欧，17-18世纪用蟾皮干燥粉末治疗浮肿 蟾酥主要有效成分为蟾毒配基类bufogenins化合物，具有很强的强心升压作用 蟾毒配基类化合物基本骨架 华蟾毒精、蟾毒灵和脂蟾毒配基的含量最高，三者约占药材干