实验高效液相色谱法(2015年)讲解.ppt

* * * * * 高效液相色谱法测定饮料中山梨酸、苯甲酸和糖精钠 1.掌握高效液相色谱法测定饮料中糖精 钠、苯甲酸和山梨酸的原理和方法 2.熟悉高效液相色谱仪的使用方法 3.了解高效液相色谱仪的仪器结构 [目的与要求] [方法原理] 在适宜的条件下,高效液相色谱可同时分离饮料中的糖精钠、苯甲酸、山梨酸。样品超声除去二氧化碳和乙醇,调pH至近中性,过滤后进高效液相色谱仪,经反相C18 液相色谱分离后,紫外检测器230nm波长处检测。 以色谱峰的保留时间定性,利用色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量 1.仪器: 高效液相色谱仪,配备二极管阵列检测器; 超声波清洗仪; 50ml容量瓶;50ml烧杯;50μl微量进样器 [仪器与试剂] 糖精钠标准储备溶液(10.0mg/ml): 准确称取于120℃烘干4h后的糖精钠(C6H4CONNaSO2·2H2O)0.5000g,加水溶解 后定容至50ml 苯甲酸标准储备溶液(5.0mg/ml): 准确称取0.2500g,加碳酸氢钠溶液25ml,加热溶解, 定容至50ml 山梨酸标准储备溶液(5.0mg/ml): 准确称取0.2500g山梨酸,加碳酸氢钠溶液25ml,加热溶 解,定容至50ml 标准混合使用液 (含糖精钠1.0mg/ml,苯甲酸0.5mg/ml,山梨酸0.5mg/ml):准确吸取各标准储备溶液5.0ml,加水定容至 50ml 2.试剂: 稀氨水(1+1);碳酸氢钠溶液:20g/L;甲醇(色谱纯) 2.配制标准系列: 取9只50ml容量瓶分别编上号码,按下表配制标准系列。 编号 0 1 2 3 4 5 标混液(ml) 0.00 1.25 2.5 5 10 20 蒸馏水(ml) 50.0 48.75 47.5 45 40 30 标混号 苯甲酸 (mg/mL) A苯甲酸 山梨酸 (mg/mL) A山梨酸 糖精钠 (mg/mL) A糖精钠 0 0 0 0 0 0 0 1 0.0125 438087 0.0125 734303 0.025 549756 2 0.025 853079 0.025 1473579 0.05 1127033 3 0.05 1672944 0.05 2907282 0.1 2246299 4 0.1 3392191 0.1 5909618 0.2 4599025 5 0.2 6741197 0.2 0.4 9167288 混合标样中各物质的浓度 样品 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 标准曲线方程 Y=3×107X-55.2 Y=6×107X-37513 Y=2×107X-53409 r 1 1 1 线性范围(mg/mL) 0～0.2 0～0.2 0～0.4 1.样品处理:吸取10.00～20.00ml汽水,放入50ml烧 杯中, 超声除去二氧化碳,用稀氨水调pH7.0,加水定 容至50ml,用滤膜(0.45μm)过滤,备用。 [操作步骤] 1.插好电极,打开电源开关,按模式键切换到pH测量状态 2.用两点法进行校正(b=2)(pH 4.01,6.86,9.18) 3.按模式进入b=2 4.将电极浸入标准缓冲液中(pH=6.86),按“校正”,当到达 终点时显示屏上显示相应校正结果;将电极放入第二种 标准缓冲液(pH=4.01或9.18),按“校正”,当到达 终点时 显示屏上显示相应校正结果;按“读数”,保存校正结果 并退回到正常的测量状态 5.将电极插入到被测液中,调节pH到所需值 pH计的使用 (1)过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤 其是使用无机盐配制的缓冲液。 前处理 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水溶剂 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：同样适用于水溶性样品和有机溶剂 3.