综合实验遗传病的诊断与咨询.docVIP

第四篇　细胞与医学遗传综合实验 第二章 遗传病的诊断、分析与咨询实验 病例一 姓名：李X 性别：女 出生日期：1976年12月6日 民族：汉 地址：江苏省XX县XX乡 就诊日期：2008年5月 主诉：2005年8月生育一男婴，出生时未觉异常，但吸吮能力较弱；三个月时发现其尚不能抬头，2岁时始能独立行走和说话，至今只能说简单词语，认知能力、辨别能力均较其他幼儿差。到当地卫生院就诊后认为该幼儿有严重的智力障碍，但未作进一步检查。目前李X已怀孕16周，急需知道所怀胎儿是否正常。 一、诊断： （一）患儿的诊断： 1.病史与家族史采集 患儿唐X，2005年8月出生，病史见主诉；无家族史。 2.症状与体征 特殊面容（眼距宽，外眼角上斜，鼻部低平，张口伸舌、流 ），双手均为通关手；严重智障；隐睾。 　　根据患儿的症状与体征，初步判断可能为Down综合征，须做染色体检查以确诊。 3.染色体检查 患儿外周静脉采血2ml，肝素抗凝，制备染色体标本，G显带染色后镜检并以染色体图像分析系统分析结果。（详见实验） 检查结果：患儿核型为46，XY，+21 诊断：Down综合征 李X已生一胎Down综合征患儿，再次生育Down综合征的将悬液均匀分配到的培养瓶内，封口后置二氧化碳培养箱培养；每隔几天用倒置显微镜观察生长情况，根据需要更换部分培养基；培养15-20天，当细胞铺满瓶壁时，收获细胞进行染色体分析。儿为Down综合有中心视力减退或丧失及视野缺损视盘境界清楚，表面毛细血管减少或丧失，视盘颜色浅淡，视网膜血管狭窄。Ⅱ代中有两名患病，Ⅱ1女性，72岁，目前已失明。Ⅲ代中有5名患病，表现为不同程度的视力减退Ⅱ1的子女。 图4-2-1 金XX系谱图 ①男女均有发病；②三代均有患者出现；③女性患者将疾病传递给后代，而男性患者不能将疾病遗传给后代；④女性不发病，但其后代患病。可见致病基因来自于女性，男性生殖细胞对表型无作用，该家系的遗传方式不符合孟德尔遗传规律，而是呈现母系遗传；考虑其为线粒体遗传病，先证者的母亲和外祖母未出现症状，符合线粒体遗传多质性、异质性、阈值效应的特点。 根据系谱分析，此病为线粒体遗传的方式。可能为线粒体遗传病Leber遗（LHON），为确 。 （3）PCR 扩增与限制性内切酶消化。 设计mtDNA 11778 引物 Primer1 : 5′- ATGGCAAGCCAACGCCACTT - 3′; Primer2 : 5′- CGTGGTTACTAGCACAGAGAGTTC - 3′ PCR 反应参数：94 ℃预变性300s，94 ℃变性30s，58 ℃退火30s，72 ℃延伸30s，共30 个循环，末轮72 ℃再延伸300s。 扩增产物10μl 加限制性内切酶 SfaNI 4U，37 ℃水浴消化12h。2 %琼脂糖凝胶电泳检测，Eagle Eye Ⅱ凝胶成像分析仪成像拍照。 图4-2-2 M:标准分子量Marker 1 :mtDNA11778 PCR 扩增条带 2 : 对照组 PCR 产物酶切后条带 3 :无家族史患者酶切条带 4～9 :家系成员酶切条带 mtDNA 突变检测结果显示正常人mtDNA11778 位点经PCR扩增后，可得到一条长924bp 的扩增片段，经SfaN I 酶切后可产生797bp + 127bp 两条片段。而LHON 患者因mtDNAG11778A 突变，丢失酶切位点而只能出现一条长924bp 的片段（图4-2-2）。 PCR-RFLP法检测证实患者有线粒体DNA11778位点的突变，可以确定是Leber视神经遗传病。也可以将DNA产物测序以进一步证实。 3. DNA 测序检测线粒体基因G11778A突变 先证者和1 例正常人的PCR 产物进行序列测定，并进行序列同源性分析。（http ://PPwww. ncbi. nlm.nih. gov，人AY714050 基因mtDNA ND4 基因组DNA）（图4-2-3）. 图4-2-3 DNA 序列分析结果 对LHON 家系中的先证者和1 例正常人的mtDNA 11778 PCR 产物进行测序证实先证者确实存在mtDNAG11778A 突变。 药物中常用的包括神经营养药物如维生素B1、B12、ATP及辅酶A等，血管扩张药及活血化淤药类如菸酸、地巴唑、维生素E、维脑路通、复方丹参等。近年来通过高压氧、体外反搏穴位注射654-2等均已取得一定效果中药及针刺治疗已证明有效，可继续应用发掘整理。尚应提及的是，禁止吸烟及饮烈性酒，增强机体体。血管分流术、网膜血管再植术治疗可使供应视神经及视网膜的眼动脉、视网膜中央动脉和睫状后短动脉的血流量增加，改善了视神经及视网膜的缺血状态，丰富了视神经