四环素耐药基因在养猪场猪粪和土壤中的分布研究.docVIP

四环素耐药基因在养猪场猪粪和土壤中的分布研究 　　摘 要：该文采用PCR方法研究了养猪场中猪粪和土壤中耐四环素乳糖发酵型肠杆菌（TR-LFE）中的tet-R分布和多样性。结果表明，在分离的258株耐四环素乳糖发酵型肠杆菌中，共检测到191株含有tet-R基因，占74.03%。各样品的耐四环素乳糖发酵型肠杆菌中tet-R基因的检出率范围为3.12%～96.87%。根据检出频率的大小，各类tet-R基因的排列顺序为：tet（A），tet（B），tet（M），tet（G），tet（C），tet（D），tet（S），所有样品都没有检测到tet（O）和tet（X）。 　　关键词：耐四环素乳糖发酵型肠杆菌；四环素耐药基因；猪粪；土壤 　　中图分类号 S815 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）07-13-03 　　Abstract：In this paper，PCR was applied to analyze the distribution and diversity of tetracycline resistant genes（tet-R gene）in tetracycline resistant Lactose-fermenting Enterobacteriaceae（TR-LFE） separated from swine manure and soil in hoggery.The research results showed that 191 of the 258 strains of TR-LFEs were detected to be tet-R gene positive，accounting for 74.03%.The rates of tet-R gene positive TR-LFE were in the range of 3.12%～96.87%.Based on the detection frequency of tet-R genes，the general rank of tet-R genes was set out as follows： tet （A），tet （B），tet （M） and tet （G） and tet （C） and tet （D） and tet （S）.All the samples were not detected to be tet （O） and tet （X）. 　　Key words：Tetracycline resistant Lactose-fermenting Enterobacteriaceaer；Tetracycline resistant genes livestock feces；Pig manure；Soil 　　1 前言 　　自Pruden等[1]第一次将抗性基因作为一种新兴的环境污染物提出以来，抗性基因在全球范围内引起了广泛的关注。随着人类对抗生素的需求日益增加，抗性基因的污染问题日益加重。抗生素是人类抵御细菌感染类疾病的武器，一旦致病菌获得这些耐药基因，就会形成“超级细菌”，它几乎可以抵御所有的抗生素。如2011年德国暴发了蔓延了欧洲9个国家的“毒黄瓜”事件，是由一种新型的高传染性有毒菌株-O104：H4血清型肠杆菌出血性大肠杆菌引起的，该菌株携带氨基糖苷类、大内环酯类、磺胺类等抗生素耐药基因，因抗生素治疗无效，而导致33人确认死亡，3 000多人受到感染，至少470人出现肾功能衰竭并发症[2]。 　　目前已发现的四环素类抗性基因的种类达到40种以上，此外还有4种磺胺类抗性基因和10种β-内酰胺类抗性基因。抗生素被用来预防和治疗动物疾病以及用作动物促生长剂，四环素作为一种广谱抗生素广泛用于禽畜养殖业[3]。抗生素进入人或动物体内，会诱导产生抗性菌株[4]，其中25%～75%的抗生素以原态或络合态的形式排出体外[5]，这些抗生素随粪便进入到环境中，会对环境中的微生物产生选择压力，诱导其产生大量的抗生素抗性基因[6]。本文通过普通PCR方法研究了养猪场猪粪和土壤中耐四环素乳糖发酵型肠杆菌（TR-LFE）中的tet-R分布和多样性。 　　2 材料与方法 　　2.1 样品采集 本次实验的样品采自上海市松江区某养猪场的新鲜公猪猪粪（GZ）、母猪猪粪（MZ）和养猪场内的蔬菜种植地的土壤（TR）。采样时间为分别为2014年9月、11月和2015年1月。 　　2.2 菌株分离 乳糖发酵型肠杆菌（LFE）采用麦康凯培养基分离培养，耐四环素乳糖发酵型肠杆菌（TR-LFE）参见文献[7]。 　　2.3 PCR实验 实验分离出258株耐四环素LFE。采用水煮法提取全细胞DNA，方法参见文献[7