色谱、质谱、联用.ppt

主要内容 色谱法的发展 质谱法的发展 液相色谱法及液质联用 色谱法的发展历史 色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作 色谱法分类 色谱法分类 按两相的物理形态、分离机理等分类 色谱法特点及与其他分离分析方法比较 （1）色谱、精馏与萃取：平衡分离方法。 （2）色谱法与精馏、萃取比较：速度快、效率、选择性高。 （3）精馏不能分离沸点相同的组分，萃取不能分离在溶剂中溶解度相同的组分；色谱法可分离沸点、溶解度相同的组分，可分离物理、化学性质相近、其他分离方法不能或难以分离的组分。 （4）色谱法每次处理样品量少。 与光谱、质谱方法比较 （1）光谱、质谱用于物质定性鉴定，色谱法定性功能差。 （2）色谱法最主要特点是适于多组分复杂混合物分离分析。 （3）色谱仪价格比分子光谱、质谱仪低得多，适用范围广。 （4）色谱检测器比分子光谱法灵敏度更高，比质谱灵敏度低。 现代分离方法两重含义 样品前处理方法：各种提取、分离技术 液液提取LLE、液相微萃取LLME 固相萃取SPE、固相微萃取SPME 微波辅助溶剂提取、加速溶剂提取 超声辅助溶剂提取…… 现代分离分析方法: 气相色谱GC、高效液相色谱H(U)PLC、 毛细管电泳CE、超临界流体色谱SFC…… 复杂样品分析思路 获取样品中所有或大多数组分的信息 基因组学、蛋白组学、代谢组学、中药分析等 获取样品中一个或多个组分的信息 环境污染物分析、食品中农药兽药分析、体液中药物分析、材料分析等 二、质谱法的发展 1918年J.J.Thomson发明了第一台质谱； 1966年Munson和Field提出了CI电离技术； 1981年出现了快原子轰击（FAB）电离技术； 随后出现了各种软电离技术： 如基质辅助激光解吸电离源（MALDI）； 电喷雾电离源（ESI）； 大气压化学电离源（APCI）； 感应耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）； 富立叶变换质谱仪（FT-ICR MS）； …… 质谱原理 质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。 常见术语: 质荷比: 离子质量(以相对原子量单位计)与它所带电荷(以电子电量为单位计)的比值,写作m/Z. 峰: 质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰. 离子丰度: 检测器检测到的离子信号强度. 基峰: 在质谱图中，指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰. 总离子流图: 在选定的质量范围内，所有离子强度的总和对时间或扫描次数所作的图,也称TIC图。 准分子离子: 指与分子存在简单关系的离子，通过它可以确定分子量，液质中最常见的准分子离子峰是[M+H]+ 或[M-H]- 。 在ESI中, 往往生成质量大于分子量的离子如M+1,M+23,M+39,M+18......称准分子离子,表示为:[M+H]+,[M+Na]+等 多电荷离子： 指带有2个或更多电荷的离子,常见于蛋白质或多肽等离子。有机质谱中,单电荷离子是绝大多数,只有那些不容易碎裂的基团或分子结构-如共轭体系结构-才会形成多电荷离子。它的存在说明样品是较稳定的。采用电喷雾的离子化技术, 可产生带很多电荷 的离子,最后经计 算机自动换算成单 质/荷比离子。 同位素离子 由元素的同位素构成的离子称为同位素离子。 各种元素的同位素,基本上按照其在自然界的丰度比出现在质谱中,这对于利用质谱确定化合物及碎片的元素组成有很大方便, 还可利用稳定同位素合成标记化合物,如:氘等标记化合物,再用质谱法检出这些化合物,在质谱图外貌上无变化,只是质量数的位移,从而说明化合物结构,反应历程等。 EI源应用最为广泛，特别是气相色谱-质谱联用仪中应用最多的离子源，它主要用于挥发性样品的电离。 原理：由进样系统进入的气体样品到达离子源，与灯丝发出的电子发生碰撞使样品分子电离。 CI源原理：利用反应气体的离子和样品分子发生分子-离子反应而生成样品分子离子。 特点： 谱图简单，最强峰为分子离子峰和准分子离子峰，碎片离子峰很少。 可用于负离子质谱，多数有机化合物的负离子CI质谱图灵敏度要比其正离子的CI质谱图高2-3个数量级。 不适合难挥发试样。 CI电离规律： CI电离与样品化合物类型及反应气体有关： （1）反应气体影响： 甲烷：有[M+H]+、[M-H]-、[