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第二章 微生物菌种选育 优良的菌种是发酵工业的基础和关键，是显著改善和提高产品种类、产量以及质量的先决条件。 菌种选育，就是要利用微生物的遗传变异的特性，采用各种手段，改变菌种的遗传性状，使其符合工业生产的需要。 本章主要内容 第一节 微生物发酵工业的菌种类型及来源 第二节 微生物发酵高产菌种选育 第三节 菌种的退化和菌种保藏 本章主要内容 第一节 微生物发酵工业的菌种类型及来源 第二节 微生物发酵高产菌种选育 第三节 菌种的退化和菌种保藏 概述发酵工程菌 一、工业发酵常见的微生物种类 1、细菌 2、酵母菌 3、霉菌 4、放线菌 5、担子菌 6、藻类 1、细菌类 2、酵母菌——酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） 2、酵母菌——假丝酵母（Candida） 2、酵母菌——毕赤酵母属（Pichia） 3、工业上常用的霉菌——曲霉属（Aspergillus） 3、工业上常用的霉菌——青霉属（Penicillium） 3、工业上常用的霉菌——根霉属（Rhizopus） 3、工业上常用的霉菌——毛霉属（Mucor） 4、放线菌 是一类G+菌、单细胞、丝状多核分支的、以孢子形式繁殖的、陆生性很强的原核微生物。 用于生产抗生素的放线菌 5、担子菌（basidiomycetes） 6、藻类（alga） 藻类中隶属原核微生物的蓝绿藻是最早的光合放氧生物，对地球表面从无氧的大气环境变为有氧环境起了巨大的作用。有不少蓝藻（如鱼腥藻）可以直接固定大气中的氮，以提高土壤肥力，使作物增产。还有的蓝藻为人们的食品，如著名的发菜和普通念珠藻（地木耳）、螺旋藻等。 用藻类将CO2转变为石油，培养单胞藻或其他藻类而获得石油，可占细胞干重的5%～50%，合成的油与重油相同，加工后可转变成汽油、煤油和其他产品。 二、工业微生物的来源 三、菌种微生物的选择性分离 菌株的分离和筛选分为以下几步： 本章主要内容 第一节 微生物发酵工业的菌种类型及来源 第二节 微生物发酵高产菌种选育 自然选育 诱变育种 杂交育种 原生质体融合 基因工程育种 第三节 菌种的退化和菌种保藏 1、诱变育种 定义：诱变育种是利用物理或化学诱变剂处理均匀分散的微生物细胞群，促使其突变率大幅提高，然后采用简便、快速和高效的筛选方法，从中挑选少数符合育种目标的突变株用于生产和研究。诱变育种除能提高产量外，还可达到改善产品质量、扩大品种和简化生产工艺的目的，该方法简单、快速、收效显著仍被广泛采用。 原理：染色体畸变和基因突变两大类。 诱变剂：能够提高生物突变频率，扩大变异幅度的物质。包括物理、化学诱变剂及生物诱变因子。 物理诱变剂：射线如紫外线、X-射线、γ-射线、快中子。使用最方便且安全的是紫外线。 化学诱变剂：碱基类似物、与碱基反应的物质。使用最多、最有效的是烷化剂。 生物诱变剂：噬菌体、转座子。 诱变程序： 【诱变】 出发菌株选择：野生型菌株；经历过生产条件考验的菌株 处理菌悬液的制备：对数生长期、菌悬液的均一性、选择孢子或单倍体细胞 避免表型延迟现象 诱变剂选择：诱变剂的致死量；诱变剂复合处理 【筛选】 筛选方案的确定：初筛和复筛；营养缺陷突变株、抗反馈阻遏和抗反馈 抑制突变株、组成型突变株、抗性突变株等 突变基因的表现：表型延迟现象（phenotypic lag）就是指某一突变在 DNA复制和细胞分裂后，才在细胞表型上显示出来，造成不纯的菌落。往往 是由于对数期细胞是多核或多倍体而造成的。隐性基因在杂合体上的出现以 及菌体内原有酶系的存在是表型延迟的两大原因。 克服表型延迟的方法： 让变异处理后细胞在液体培养基中培养几小时， 以让细胞的遗传物质复制，让细胞繁殖几代，以得到纯的变异细胞。这样， 隐性的变异就会显现出来，若不经液体培养基的中间培养，直接在平皿上分 离就会出现变异和不变异细胞同时存在于一个菌落内的可能，形成混杂菌 落，以致造成筛选结果的不稳定和将来的菌株退化。 2、杂交育种 定义：一般是指人为利用真核微生物的有性生殖或准性生殖，或原核微生物的接合、F因子转导和转化等过程，促使两个具有不同遗传性状的菌株发生基因重组，以获得性能优良的生产菌株。 程序：选择原始亲本→诱导筛选直接亲本→直接亲本之间亲和力鉴定→杂交→分离到基本培养基或选择性