11植物脱毒技术精读.pptVIP

11 植物脱毒技术 为什么要培育脱毒苗？ 由病毒引起植物产量和品质退化的事例甚多。大多数园艺植物都受到一种或几种病毒侵染，且带毒株率高。病毒对寄主植物可造成毁灭性危害,导致大幅度减产,甚至全株死亡。潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。受病毒侵染的植物全身终身带毒，目前尚无有效药物可以治愈。利用植物茎尖等方法脱毒，培育无病毒苗，是解决病毒危害的有效途径。 什么叫无病毒苗？ “无病毒苗”——是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。要脱除植物体内所有病毒包括未知病毒是不可能的，准确地说“无病毒苗”是指“特定无病毒”，也称“检定苗”。对被病毒侵染的植物优良品种的植株进行脱毒，培育出无病毒母株，并在不受再侵染的条件下无性繁殖，是获得无病毒苗的根本途径。 第一节 茎尖培养脱毒 一、病毒在植物体内的分布如何 病毒侵染到植株的叶片后,经过一段时间,即向附近细胞增殖转移,转移速度很慢,每小时只有几微米.当叶片内病毒浓度增大到一定量时,就转移到韧皮部,随后通过维管束转移到其他部分。 由于植株生长点附近病毒的浓度很低，甚至没有。所以，应用茎尖培养脱毒研究获得成功。由于茎尖培养脱毒效果好，后代遗传性稳定，所以是目前生产上最常用的脱毒措施。 为什么茎尖培养能够除去病毒？ 一是病毒运转速度慢。 二是茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的病毒数量极少，几乎测不出来。 进行茎尖培养时，切取茎尖越小，带有病毒的可能性越小，但太小不易成活。不同种类的植物和不同病毒，切取茎尖的大小也不相同。 如马铃薯Y病毒，切取茎尖长度1.0-3.0mm,马铃薯X病毒，切取茎尖长度0.2-0.5mm茎尖培养，除可除去病毒外，尚可除去其他病原体。 二、无病毒苗的获得 （一）茎尖剥离 取幼苗茎尖2-3cm小段，剥去可见大叶，放在烧杯内，用自来水冲洗1小时左右，移入无菌室进行严格消毒，先用75%酒精快速浸泡一下，再放入5%的漂白粉溶液内消毒7-10min,然后用无菌水冲洗3-4次。在双筒解剖镜下剥去幼叶，最后露出圆滑的生长点，用注射的针头侧刃或自制的解剖针，仔细地切取带有1-2个叶原基的生长点，随即接种到三角瓶内的 （三）提高脱毒效果 切取茎尖进行组培前，进行预处理，可以提高脱毒效果。 1.高温处理 又称温热疗法。某些病毒受热以后，不稳定，失去活性，病毒部分或全部钝化。 2.低温处理 又称冷疗法。 如菊花在5℃条件 下分别处理4个月或7.5个月，没有菊花矮化病毒（CSV）的无病毒苗分别是67%和73%。 3.化学处理 又称化学疗法。嘌呤、嘧啶、氨基酸、抗生素处理，可在某种程度上抑制植物体内或离体叶片内病毒的合成。但不能使病毒失活。近年来发现三氮唑核苷用于防治一系列动物DNA和RNA病毒，对植物也有效。 第二节 其他途径脱毒 一、愈伤组织脱毒 在受感染的组织形成的愈伤组织中，并非所有的细胞都均匀一致地带有该种病原。在用机械方法由受烟草花叶病毒（TMV）侵染的烟草愈伤组织中分离出来的单个细胞中，只有40%带有这种病毒。由受侵染的愈伤组织中能再生出很多不含有TMV的植株。 二、珠心胚培养脱毒 柑桔类多胚品种中除一个受精胚以外，尚有多个由珠心细胞形成的无性胚，称为珠心胚。珠心胚与维管束系统无联系，因此，由珠心胚产生的植株全部为无病毒。但珠心胚大多是不育的，必须分离培养才能发育成正常的幼苗。珠心胚培养技术对除去柑桔主要病毒十分有效。 三、微尖嫁接脱毒 微尖嫁接技术，指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（0.14-1.0mm,带3-4叶原基）以培养脱毒苗的技术。这一方法适用于茎尖培养脱毒生根困难，不能形成完整植株的植物，如柑桔、桃、苹果等。茎尖来源包括成年无病毒植株的茎尖、热处理或温室培养植株的茎尖以及脱毒试管苗茎尖等。以热处理植株茎尖嫁接应用最广泛。 四、花药培养脱毒 第三节 脱毒苗鉴定 经茎尖组织培养的脱毒苗，要进行检测鉴定，确定是否还有病毒的存在。只有经检测后被鉴定为无病毒的苗，才能确认为脱毒苗，方可用于扩大繁殖。 一、植物病毒症状检测（目测法）