第2章DNA结构及其复制综述.ppt

第五章 DNA复制(DNA Replication) 细长的双螺旋DNA经过逐级压缩(核小体，螺线管，突环) 形成染色体，最终定位细胞核或拟核（细胞器 ），DNA复制是多种酶和辅助因子协同作用以半保留半不连续的方式进行的。 第一节 染色质结构 第二节 原核生物DNA复制 DNA复制理论的研究进展 在发现DNA双螺旋结构同时，Watson和Crick就提出DNA复制的可能模型。其后在1956年A.Kornbery首先发现DNA聚合酶；1958年Meselson及Stahl用同位素标记和超速离心分离实验为DNA半保留模型提出了证明；1968年Okazaki（冈畸）提出DNA不连续复制模型；1972年证实了DNA复制开始需要RNA作为引物；70年代初获得DNA拓扑异构酶，并对真核DNA聚合酶特性做了分析研究；这些都逐渐完善了对DNA复制机理的认识。 一、DNA复制：亲代双链DNA分子在DNA聚合酶的作用下，分别以每条单链 DNA分子为模板，聚合与自身碱基可以互补配对的游离的dNTP, 合成出两条与亲代DNA分子完全相同的子代DNA分子的过程。 以亲代DNA分子为模板合成一个新的子代DNA分子的过程。 复制子 含有一个复制原点并在细胞中能被自主复制的任何DNA分子。 一、原核生物的复制子 二、 真核生物的复制子 原核生物的复制子 所有的原核生物染色体、许多噬菌体以及病毒的DNA分子都呈环形，并由一个复制子构成。 DNA的半不连续复制 参与DNA复制的有关物质 参与DNA复制的有关物质 1.模板和底物：DNA复制实际上就是DNA指导的DNA合成代谢。因此，必须有DNA作为复制的模板和三磷酸核苷酸(dATP,dGTP，dCTP，dTTP) 。 2.RNA引物 大肠杆菌的DNA聚合酶Ⅲ（p773 Table 20.3） 解旋酶(Helicase) （DnaB） 单链DNA结合蛋白(SSBP) 引物酶(Primase) 酵母DNA复制所需要的酶 * * Molecular Biology Course 大肠杆菌结构 大肠杆菌染色体的大小 大小：大肠杆菌（E.coli）染色体和大多数细菌的基因组只含一个环状超螺旋分子，4.6 Mb，其总长度大约1300μm. 2. 拟核区：DNA浓度高达30～50mg/ml，并包含着所有与DNA结合的蛋白质如聚合酶（polymerase）、阻抑物（repressor）和其他成分。 细菌染色体 DNA双螺旋（2nm) 核小体（11nm） 螺线管（30nm) 突环(300nm) 染色体（1400 nm） 核小体及核小体核心颗粒 核小体：染色质在电子显微镜下观察时呈现为由10nm的球状 颗粒和DNA纤维组成的念珠状外观。这些球状颗粒称为核小体（nucleosome）。 核小体间的DNA称为接头DNA（linker DNA）。核小体所缔合的DNA约为166bp（146+20），由于连接DNA（约55 bp ）易于为核酸酶所作用。 因此，当染色质以微球菌核 酸酶（micrococcal nudease）等 轻微处理后，染色质就产生一系 列依次相差200bp左右的长度不 等的DNA片段。??? 30nm纤丝 ?30nm纤丝：核小体链呈螺旋形缠绕，并形成超微螺旋，称为“螺线管”（solenoid），即30nm纤丝。这种超微螺旋的直径约为3Onm，内径10nm，螺距为llnm，为中空呈管状结构。这种螺旋管的每一转由6个核小体组成，螺线管是染色体的二级结构。 Molecular Biology Course 突环结构 螺线管的纤丝沿着它中央的蛋白质轴发射出大小不等的环，像灯刷染色体那样，这些观察证明，染色体是由一系列的环状的域（domain）组成的。这种结构可以说是染色体的三级结构。 DNA复制及复制叉 二、复制叉:亲代DNA链分开及新生DNA开始复制的Y型结构。 真核生物的复制子 真核生物的线形染色体是由多复制子构成，每个复制子都有自己的起点。一个典型的哺乳动物细胞有50 000～100 000个复制子，每个复制子长约40～200kbp。在相邻复制叉的复制泡相遇处，新生DNA融合并形成复制完整的DNA。 郭爱娟 BCU 3’ 5’ 3’ 5’ OK ! How ? 5’ 3’ 5’ 3’ 一、参与DNA复制的模板、底物和引物 二、参与DNA复制的有关酶和蛋白 1.DNA拓扑异构酶(DNA Topisomerase) 2.解旋酶(Helicase) （DnaB）