微生物实验七放线菌的形态观察要点分析.docVIP

实验七 放线菌的形态观察 13生物基地 201300140059 刘洋 2014-11-23 同组者：吕赞 刘沛余 马华峥 实验器材 菌种 青色链霉菌、弗氏链霉菌3-5 d高氏I号培养基平板培养物 仪器和其他用品 酒精灯，载玻片，盖玻片，载玻片夹子，镊子，显微镜，接种环，平皿，试管，烧杯，滴管，无菌水，酒精等 培养基 高氏I号培养基（配方见附录） 实验目的 学习并掌握放线菌的形态、观察方法——插片法。 了解放线菌的基本形态。 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。 实验原理 1．高氏I号培养基 高氏 I 号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如Fe元素。 2．放线菌 放线菌（actinomycetes）是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。广泛存在于自然界中，土壤中最多，主要以孢子繁殖，至今发现的共有五六十属，它与人类的关系极为密切，根据1978年的统计，在当时已发现的5128种抗生素中，有3165种为各种放线菌所产生，链霉菌属又占放线菌中的首位（占放线菌产生的抗生素中的87.5％）；有的放线菌还可用于生产维生素、酶制剂等；少数会引起人类、动物、植物的疾病。链霉菌属是放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群，其孢子丝的形态多样，而且性状较稳定，是对它们进行分类、鉴定的重要指示。因此学习如何培养和观察它们不仅对科学研究有很大的意义，对实际生活应用也有很大的帮助。 本实验采用合成培养基进行培养，采用插片法取菌观察，不仅可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的放线菌形态，除此之外还可以采用玻璃纸法、印片法进行观察。链霉菌属（Streptomyces）共约1，000多种，它们具有发育良好的菌丝体，也是实验中选取它们观察的重要原因。 在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 ? 3．插片法观察放线菌 将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 放线菌的菌落特征 干燥、不透明，表面呈紧密的丝绒状，上有一层色彩鲜艳的干粉；菌落与培养基的连接紧密，难以挑取。其孢子的表面结构、形状及颜色在一定条件下比较稳定，是鉴定菌种的重要依据。放线菌在自然界分布很广，绝大多数为腐生，少数寄生。 实验步骤 配制高氏I号培养基（200mL）： 1)按配方先称取可溶性溶粉、放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉尽量溶解，再加入沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶解。 2)称取其他各成分依次溶解。由于条件限制，对于微量成分FeSO4·7H2O，直接用分析天平称量，加入即可。 3)待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积，进行pH?调节到7.2～7.4。 4)材料灭菌：将所配溶液装在三角烧瓶中并加棉塞，棉塞外包一层牛皮纸，并用麻绳捆好，用记号笔标记组号。取十个培养基，用牛皮纸包好，用记号笔标记大小面。同理盖玻片也用牛皮纸包好，再在盖玻片上加盖一层牛皮纸纸，用牛皮纸包好后，用记号笔标记，镊子也包好一起灭菌。将上述物品放入密封的加压灭菌锅中进行高压蒸汽灭菌121℃、20分钟。 倒平板：取融化并冷却高氏I号培养基倒平板，倒平板时尽量使培养基厚一些，凝固待用。? 接种：按照无菌操作的要求用接种针挑取菌种培养物在平板上密集划线接种。? 插片：以无菌操作用酒精泡过并在酒精灯上灼烧的镊子将灭菌的盖玻片以大约与培养基成45°角插入平板内，并与划线垂直，每个平板插入3个盖玻片。? 培养：将平板倒置，28℃培养7 d。? 镜检：用酒精泡过并在酒精灯上灼烧的镊子小心拔出盖玻片，擦去一面培养物，然后将有菌的一面朝下放在载玻片上，直接用低倍镜和高倍镜镜检，必要时可用油镜观察。 注意事项 在插片法操作过程中，注意在移动附着有菌体的盖玻片时勿碰动菌丝体，必须菌体朝上，以免破坏菌丝体形态。如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。 实验结果 各种菌丝形态特征 菌种 基内菌丝形态 气生菌丝形态 孢子丝形态 青色链霉菌 较长，疏松，多分枝 毛状 紧密螺旋形 弗氏链霉菌