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生物化学思考题 蛋白质 1、蛋白质含量的测定方法有哪些？ 答：蛋白质含量的测定方法主要有： （1）凯氏定氮法： 蛋白质含量＝蛋白质含N量×6.25 （2）紫外比色法 （3）双缩脲法 （4）Folin—酚法 （5）考马斯亮兰G—250比色法 2、蛋白质的基本组成单位是什么?蛋白质经过怎样处理才可产生这些基本组成单位? 蛋白质的基本组成单位是蛋白质经过处理可产生单位1）酸水解：常用 6 mol/L的盐酸或4mol/L的硫酸在105-110℃ 20小时左右。 （2）碱水解 ：一般用5 mol/L氢氧化钠煮沸10-20小时。 （3）酶水解：已有十多种蛋白水解酶，如胰蛋白酶、糜蛋白酶、热激蛋白酶等。反应条件温和，酶水解时间长，反应不完全。 3、已知末端α-COOH，pK3.6，末端α-NH3+pK8.0 ε-NH+3pK10.6。 计算Ala-Ala-Lys-Ala的等电点。 4、简述蛋白质一级结构的测定顺序。 答：测定蛋白质一级结构的先后顺序为： （1）测定蛋白质分子中多肽链的数目。 （2）拆分蛋白质分子的多肽链。 　　（3）断开链内二硫键。 　　（4）分析每条多肽链的氨基酸组成比及数目。???? （5）鉴定多肽链的N、C瑞残基。 　 （6）裂解多肽成小的肽段。 　 （7）测各肽段的氨基酸序列。 　 （8）重建完整多肽链的一级结构。 　 （9）确定二硫键的位置。 5、从热力学上考虑，一个多肽的片段在什么情况下容易形成α-螺旋，是完全暴露在水的环境中还是完全埋藏在蛋白质的非极性内部?为什么? 答：当多肽片断完全埋藏在蛋白质的非极性内部时，容易形成氢键。因为在水的环境中，肽键的C＝O和N－H基团能和水形成氢键，亦能彼此之间形成氢键，这两种情况在自由能上没有差别。因此相对的说，形成α－螺旋的可能性较小。而当多肽片段在蛋白质的非极性内部时，这些极性基团除了彼此之间形成氢键外，不再和其它基团形成氢键，因此有利于α－螺旋的形成。 6、 某氨基酸溶于pH7的水中，所得氨基酸溶液的pH为6，问此氨基酸的pI是大于6、等于6还是小于6? 氨基酸在固体状态时以两性离子形式存在。某氨基酸溶于pH7的水中，pH从7下降到6，说明该氨基酸溶解于水的过程中放出了质子，为了使该氨基酸达到等电点，只有加些酸，因此氨基酸的等电点小于6。 ? 7、一系列球状的单体蛋白质，相对分子质量从10000到100000，随着相对分子质量的增加，亲水残基与疏水残基的比率将会发生什么变化? 随着蛋白质相对分子质量的增加，表面积与体积的比率也就是亲水残基与疏水残基的比率必定减少。假设这些蛋白质是半径为r的球状蛋白质，由于蛋白质相对分子质量的增加，表面积随r2的增加而增加，体积随r3的增加而增加，体积的增加比表面积的增加更快，所以表面积与体积的比率减少，因此亲水残基与疏水残基的比率也就减少。 8、维持蛋白质一、二、三、四级结构的键或力是什么? 维持蛋白质一级结构的键或力维持蛋白质二级结构的键或力维持蛋白质三、四级结构的键或力沉淀蛋白质的方法有哪些? 沉淀蛋白质的方法有蛋白质二级结构有哪些主要形式? （2）β-折叠（β- pleated sheets） （3）β-转角 (β-turn) （4） 无规卷曲 （5）Ω环 11、有一个七肽，经分析其氨基酸组成分别为Lys、Pro、Arg、Phe、Ala、Tyr和Ser。此肽与DNFB不反应。用胰凝乳蛋白酶降解，得到两个肽段 ，其氨基酸组成分别为Ala、Tyr、Ser和Pro、Phe、Lys、Arg。这两个肽段与DNFB反应，分别生成DNP-Ser和DNP-Lys。此肽与胰蛋白酶作用，同样生成两个肽段，它们的氨基酸组成分别为Arg、Pro和Phe、Tyr、Lys、Ser、Ala。试推测此多肽的结构和氨基酸组成。 答：由此肽与DNFB不反应可知，该七肽必为一环状多肽。 因为胰凝乳蛋白酶的酶切位点Tyr、Phe、Trp等疏水氨基酸的羧基端，因此用胰凝乳蛋白酶降解得到的Ala、Tyr、Ser和Pro、Phe、Lys、Arg两个肽段，其酶切位点分别为Tyr和Phe。加之，这两个肽段与DNFB反应，分别生成DNP-Ser和DNP-Lys，表明在Ala、Tyr、Ser肽段中，与Tyr相临的氨基酸残基是Lys，因此其氨基酸顺序为Ser - Ala-Tyr；而在Pro、Phe、Lys、Arg肽段中，与Phe相临的氨基酸残基为Ser。 由于胰蛋白酶的酶切位点主要为Lys、Arg的羧基端，因此，用胰蛋白酶作用得到的Arg、Pro和Phe、Tyr、Lys、Ser、Ala两个肽段，表明Arg与Pro相临，且Pro与Lys相临。 综上所述，此肽段的