【参考】我国特有产毒动物多肽毒素的基础与应用基础研究.Doc

一、研究内容 本项目将主题，关键科学问题，从动物多肽、多肽通道相互作用、多肽毒素应用4个层面上，针对（1）动物多肽毒素；（3）；（）毒素临床个开展深入研究。紧紧围绕解决（1）动物多肽毒素在已有工作基础上继续构建快速基因分离和质谱联用鉴定方法，确定不同地区毒动物的多肽毒素资源的差异性挖掘和我国特有动物资源（）动物多肽毒素通道研究研究动物多肽毒素为多肽毒素药物提供依据（）多肽毒素的临床研究二、预期目标 本项目的总体目标： 在动物多肽、多肽通道相互作用、多肽毒素应用4个，围绕主题，全面（1）动物多肽毒素库的构建；（2）；（3）动物多肽毒素通道多肽毒素的临床1、动物多肽毒素（成果以有毒的毒素基因文库存放于中国典型培养物保藏中心为标志，同时注册毒素的知识产权）2、3、多肽毒素通道的相互作用Martentoxin/钾通道BKCa、蝎毒素BmkAS/钠通道Nav1.8、蜘蛛毒素JZTX－VNav1.8、蜘蛛毒素Huwentoxin-VI/膜通道TRPV1等）的结构-功能关系及其在生理/病理中的作用。在蛋白质一级结构和空间结构以及蛋白质复合物结构水平4、多肽毒素应用具有自主知识产权药多肽毒素临床前研究、优秀人才培养国家教育部长江学者奖励计划岗位或讲座教授-2名，中科院百人计划入选人才-3名，国家杰出青年科学基金获得者-2名。培养博士后20-30名，培养博士生名，硕士生120-150名。、。 三、研究方案 整体研究思路： 本项目在动物多肽、、多肽毒素-通道相互作用、多肽毒素应用4个层面上，全面对动物多肽毒素；（）；（）毒素的临床个内容本项目整合国内相关实验室已建立良好生物信息学、、电生理技术、动物行为学和模式动物模型平台，围绕项目主题目标，通力合作，进行攻关。本项目的立意、总体研究思路、方案设计具有前沿性、创新性和实施的可行性见图所示思路 图-1 项目及课题的总体研究方案 技术路线： 本项目紧紧围绕关键科学问题“动物多肽毒素与疾病相关膜通道及受体相互作用机制”，针对于上述四个方面的研究内容，制定相关技术路线如图－2、3、4、5、6所示。 图 2 我国特有产毒动物多肽毒素资源库和数据库构建的 研究方案和技术路线 图 3 动物多肽毒素与膜通道及受体选择性作用的研究方案和技术路线 图 4 动物多肽毒素与膜通道及受体相互作用分子机制的研究方案和技术路线 图 5 动物多肽毒素新靶点鉴定及其信号通路的研究方案和技术路线 图6 先导多肽毒素的设计改造及临床应用基础研究的方案及技术路线 可行性分析： 本项目有近0年的研究积累，已建立了完成项目目标所需技术平台，在分子-细胞-组织-动物模型不同层面上集积了国内相关领域中具有较好研究积累和特色实力的科研人员，通过学科交叉、平台共享、优势互补、刚性约束通力攻关在研究领域取得系列重大突破是完全可行的。 我国动物多肽毒素资源库的构建与保护及资源挖掘研究本项目相关课题组在毒素基因文库构建及基因分离方面处于国际领先水平在多肽毒素的分离纯化方面的研究水平与国际相当。通过构建野生有毒动物多肽毒素基因文库，规模地分离和鉴定多肽毒素基因，不仅可以有效地保护我国野生有毒物种资源，而且还可以有效地挖掘和利用多肽毒素。我国动物多肽毒素研究本项目已具有规模地生产基因重组多肽毒素的能力，配置了多通道膜片钳系统，在进一步完善我国相关膜通道表达体系的基础上，可以规模地筛选和鉴定选择性膜通道多肽毒素。通过氨基酸残基定点突变技术、蛋白质结构测定技术、国际领先的多肽毒素-膜通道相互作用的计算机模拟技术等，完全可以揭示多肽毒素-膜通道相互作用的分子机。本项目??-crystallins在心脏、肺、胃肠道等组织广泛分布，虽然遗传学的证据提示这类基因和其蛋白产物与上皮组织的分化，发育和肿瘤抑制相关，但其功能和作用机制远未阐明。三叶型多肽与上皮修复与重建、炎症和肿瘤发生与迁移密切相关，但目前介导其生物学活性机制尚未揭示。昆明动物所项目组利用两栖类三叶型多肽毒素从血小板成功筛选到介导其生物活性的新型膜蛋白PHB；同时，初步发现三叶型多肽毒素与??-crystallins复合物的细胞调节活性（pM浓度下诱导细胞迁移、nM浓度下引起细胞脱落、凋亡）和可能的囊泡化入胞，核定位及转录调节的细胞作用机制。在此基础上，充分利用外源“多肽毒素”取材方便，活性高，专一性强的优势，为解析非晶状体??-crystallins和三叶型多肽的生物学功能和分子作用机制，揭示其与PHB家族蛋白的作用关系,以及它们所整合的细胞调节通路在上皮修复与重建、炎症和肿瘤发生与转移中的分子机制和作用位置提供全新的线索。 4、具有药用前景的动物多肽毒素应用研