HPLC同时测定正天丸中芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5—O—甲基维斯阿米醇苷的含量.docVIP

HPLC同时测定正天丸中芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5—O—甲基维斯阿米醇苷的含量 　　[摘要] 该研究以高效液相色谱同时测定正天丸（钩藤、白芍、川芎、当归、防风等）中芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量。试验中采用Insertil ODS-C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm），以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，检测波长230 nm。由试验结果可知，芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷在11.37～ 170.5，2.188～32.82，2.896～43.44，3.000～45.00 mg·L-1峰面积与进样量线性关系良好，r分别为0.999 9，0.999 9，1.000 0，1.000 0；回收率（n = 6）分别为102.3%（RSD 1.2%），99.71%（RSD 1.9%），101.2%（RSD 1.2%），99.40%（RSD 2.4%）。按所建方法对5批样品中上述4种成分的含量进行测定，结果均令人满意。该方法简便、准确，重复性好，可用于正天丸中芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的质量控制。 　　[关键词] 中成药；正天丸；芍药苷；阿魏酸；升麻素苷；5-O-甲基维斯阿米醇苷；HPLC 　　正天丸系由钩藤、白芍、川芎、当归、防风、地黄、白芷、羌活、桃仁、红花、细辛、独活、麻黄、附片、鸡血藤15味中药组成的复方制剂，具有疏风活血、养血平肝、通络止痛之功效，适用于多种类型的头痛[1]。本品为传统的水丸剂，目前对其功效成分的研究较少[2-3]，现行质量标准也仅测定白芍中芍药苷的含量，而且操作方法繁琐，一定程度上难以保证测定结果的准确可靠，从而影响该品种内在质量的有效评价。 　　处方中的君药川芎、臣药当归，具有活血行气、祛风止痛之功效；防风可解表祛风、胜湿止痛；白芍养血止痛[4]。上述诸药对正天丸之功效发挥均起重要作用，目前对上述各味药材均已进行了深入研究，明确其功效成分及药理活性[5-7]。本研究遵照复方制剂一测多评[8]的原则，在原质量标准的基础上，优化改进测定方法，采用HPLC同时测定正天丸中芍药苷、阿魏酸、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量，方法准确、操作简便，为本品提供了更加全面有效的定量分析手段。 　　1 材料 　　Shimadzu 20-AD高效液相色谱仪（日本岛津，包括四元泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、DAD检测器、2010色谱工作站）；XS 105电子分析天平（Mettler Toledo公司）；超声波清洗器（厦门李氏和达超声波设备有限公司）。 　　芍药苷、阿魏酸、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为110736-201035，110773-200611，111522-201008，111523-201007；乙腈为色谱纯；甲醇、乙醇、磷酸为分析纯；水为超纯水。 　　正天丸，深圳三九药业股份有限公司生产，批号为1112020H，1111023H，1202018H，1112035H，1201023H；阴性样品为本实验室依据处方量自制。 　　2 方法与结果 　　2.1 溶液的制备 　　2.1.1 混合对照品溶液 分别取芍药苷、升麻素苷、阿魏酸、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，用甲醇稀释成每1 mL分别含60，15，10，15 μg的混合对照品溶液，混匀，即得。 　　2.1.2 供试品溶液 将样品研细，取1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇15 mL，称定质量，超声处理30 min（500 W，33 kHz），取出，冷却，用稀乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液即得。 　　2.1.3 阴性样品溶液 依处方量分别制备缺白芍、防风、当归、川芎的阴性样品，按2.1.2项下方法制成阴性样品溶液，备用。 　　2.2 色谱条件及系统适用性考察 　　采用Insertil ODS-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B），梯度洗脱，0～20 min，11%A，20～40 min，11%～20%A，40～45 min，20%A，45～50 min，20%～90%A，50～60 min，90%A，流速1.0 mL·min-1；柱温30 ℃；检测波长230 nm；进样量10 μL。在上述色谱条件下，对照品、样品、阴性样品色谱图见图1。样品与对照品在相同保留时间内有色谱峰，而阴性样品无色谱峰，说明样品中其他成分对待测成分无干扰，且4个成分与相邻色谱峰均能达到基线分离，分离度均大于1.5。 　　2.3 线性关系的考察 　　取芍药苷对照品5.89 mg，用甲