HPLC测定复方熊胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸的含量.docVIP

HPLC测定复方熊胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸的含量 　　[摘要] 目的：鉴定并测定复方熊胆胶囊中人工熊胆的含量，以保证药品质量。方法：参考《中国药典》质量标准部分，采用HPLC鉴定并测定人工熊胆在每粒胶囊中的含量。结果：HPLC实验结果显示，样品与牛磺熊去氧胆酸对照品在相同时间出现对应色谱峰；复方熊胆胶囊中人工熊胆含量不低于10 mg/粒。结论：通过HPLC可以有效地鉴定复方熊胆胶囊中的人工熊胆，并且能精确地测定人工熊胆的含量。 　　[关键词] 复方熊胆胶囊； 牛磺熊去氧胆酸； 定性鉴别； 含量测定 　　[收稿日期] 2013-12-28 　　[基金项目] 北京中医药大学科研创新团队-中药先导化合物发现与开发创新团队项目（2011-CXTD-15） 　　[通信作者] *李强，Tel：（010E-mail：lq_cn@126.com 　　复方熊胆胶囊是以人工熊胆、麝香、黄芪、乳香等为原药材制成的胶囊制剂，源于犀黄丸，具有镇静、解热、抗惊厥、抑菌、抗炎、抗过敏、镇咳、祛痰、平喘、助消化、去胆石、强心、降压及抗肿瘤作用。由于复方制剂原料药较多，成分复杂，为保证复方制剂的质量，需对其主要成分进行鉴别并测定含量。本文选取了复方熊胆胶囊中君药人工熊胆为例，探讨复方中主要成分的鉴别和含量测定方法，为保证复方制剂的质量提供科学的依据。 　　1 材料 　　电热恒温水浴锅（北京长安永创科学仪器有限公司），旋转蒸发仪（上海亚荣），Agilent 1100 高效液相色谱仪（在线脱气机、四元泵、自动进样器、VWD检测器）；MILLIPORE Simplicity超纯水器超声波清洗器（型号SK5200H，功率150 W，频率20 kHz，上海科导仪器有限公司）。试剂乙腈（色谱纯，Fisher chemical）。牛磺熊去氧胆酸钠（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号0816-200004）。 　　2 方法与结果 　　2.1 人工熊胆的HPLC鉴别 　　2.1.1 色谱条件[1-2] Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流速1.1 mL·min-1。根据相关文献及对照品和样品的全波长扫描结果选择204 nm为检测波长。本实验检测以下流动相条件：①乙腈-2‰磷酸溶液（31∶69）；②乙腈-水（水相0.3%磷酸以三乙胺调pH至4）（29∶71）。结果表明，牛磺熊去氧胆酸钠对照品在乙腈-水（水相0.3%磷酸以三乙胺调pH至4）（29∶71）流动相条件下与其他色谱峰达到基线分离。 　　2.1.2 供试品溶液的制备 取本品0.5 g，精密称定，置三角瓶中，加无水乙醇45 mL，超声提取45 min，取出冷却，无水乙醇定容至50 mL，即得。 　　2.1.3 对照品溶液的制备 精密称取牛磺熊去氧胆酸钠适量，制成0.2 g·L-1的对照品溶液。 　　2.1.4 阴性对照品制备 除熊胆外，称取1/1 000处方量的药材，按复方熊胆胶囊制备工艺制备成干浸膏，并按比例与淀粉混匀，按供试品溶液制备法制备。 　　2.1.5 HPLC检测 取缺熊胆阴性对照溶液，精密吸取续滤液10 μL，注入高效液相色谱仪，按2.1.1项下的色谱条件测定，记录色谱图，见图1。由色谱图可知，阴性对照品对鉴别无干扰，供试品与对照品在相同时间出现色谱峰。试验结果表明，HPLC可以准确鉴别复方熊胆胶囊中的人工熊胆成分。 　　2.2 HPLC测定人工熊胆含量 　　2.2.1 色谱条件 同2.1.1项。 　　2.2.2 供试品溶液的制备 称量4份样品各0.5 g，精密称定分别装于10 mL量瓶中，加无水乙醇45 mL，依次采用回流提取，超声15，30，45 min提取，取出冷却，无水乙醇定容至50 mL，进行测定，提取率 　　图1 牛磺熊去氧胆酸钠对照品（A）、复方熊胆胶囊样品（B）和阴性溶液（缺人工熊胆，C）的HPLC图 　　Fig.1 HPLC chromatograms of tauroursodeoxycholic acid sodium salt （A）， compound bile capsule （B） and negative solution（lack of artificial bile， C） 　　（峰面积/称样量）分别为1 618.6，1 647.5，1 886.0，1 891.1。结果表明，超声45 min提取基本完全，故采用超声45 min试验，即取本品0.5 g，精密称定，置三角瓶中，加无水乙醇45 mL，超声提取45 min，取出冷却，无水乙醇定容至50 mL，即得。 　　2.2.3 线性关系考察 精密称取牛磺熊去氧胆酸钠适量，制成0.24 g·L-1的对照品溶液，分别吸取6，8，