细胞器分级分离与鉴定课件.pptVIP

CHAPTER 一 实验原理 细胞内各种结构的比重和大小等都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同介质和不同转速的离心，将细胞各种组分分级分离出来 cell fractionation 。 组织细胞匀浆 分级分离 分析 细胞器（细胞核和线粒体）的分级分离和鉴定 差速离心法differential centrifugation 原理：由低速到高速逐渐沉降将不同大小的颗粒分离。 匀浆 离心 1 000G20分钟 细胞核 线粒体等 离心 15 000G120分钟 微粒体 离心0.26%脱氧胆酸钠 15 000G20分钟 核糖体等 离心 20分钟 10 000G 差速离心法 1 取兔肝，用生理盐水反复洗涤 2 称取湿重约1g的兔肝置培养皿中，量取8ml预冷的匀浆缓冲液（蔗糖-氯化钙溶液）加入，尽量剪碎肝组织 3 将剪碎的肝组织倒入匀浆器匀浆（匀浆器下段浸入盛有冰块的小烧杯中保持低温），匀浆彻底后，8层纱布过滤（先用少量匀浆缓冲液润湿纱布），滤液转移至玻璃离心管中。 4 平衡、离心，2500rpm,10min（上离心机前注意平衡每对离心管），将上清移入另一玻璃离心管中，沉淀用残余液体吹打均匀涂片① ，做好标记。 5 将上清按4步骤重新离心一次。弃沉淀，将上清移入用于高速离心的塑料管。 6 离心，13500rpm,10min（离心前注意平衡每对离心管），弃上清，留沉淀,用残余液体吹打均匀涂片② 7 直接在剩余沉淀中加入0.5ml詹纳斯绿染液染10min（吹打均匀），滴一滴在载玻片上，盖上盖玻片（吸水纸吸去多余染液），用油镜观察 8 在涂片①、②滴加甲苯胺兰染液染10min，冲去染液，在高倍镜下观察 二 实验方法 CHAPTER