第三节酶的作用机制解析.ppt

第三节 酶的作用机制 从溶菌酶结构的研究中，已制成它与底物形成复合物的结晶，并得到了X线衍射图，证明了ES复合物的存在 二、酶的功能部位 酶的活性部位 必需基团 调控部位 1、酶的活性中心(active center) （1）活性中心的两个功能部位： 结合部位（ binding site） 酶分子中与底物结合的部位 决定酶对底物的专一性 催化部位（ catalytic site ） 酶分子中促使底物发生化学变化的部位 决定酶促反应的类型，即酶的催化性质 （2）活性中心的形成 活性中心的功能基团主要由氨基酸残基的侧链所提供，在结合蛋白酶类中还有辅酶的功能基团参加。 一个酶的活性中心的氨基酸残基，并不是密集于某段肽链内，而是通过肽链弯曲拆叠才使分散的氨基酸残基相互接近。 （3）酶活性部位的主要特征 相对酶整个体积来说，活性部位占据的空间很小 活性部位是一个三维空间结构，具有特殊的构象 活性部位通常位于酶蛋白的两个结构域或亚基之间的裂隙，或位于酶分子表面的凹槽。 大多数底物都是通过次级键与酶结合 构成活性中心的大多数氨基酸残基为疏水性，使此小区形成一个非极性的微环境，有利于与底物结合 活性中心表现出一定的柔性和可运动性。 一些酶活性部位的AA残基 活性中心内的必需基团 常见的必需基团 丝氨酸的-OH 半胱氨酸的-SH 组氨酸的咪唑基 天冬氨酸和谷氨酸的-COOH 赖氨酸的ε-NH2 酪氨酸的酚羟基 牛胰蛋白酶 酶的活性中心与酶蛋白空间构象完整性之间，是辩证统一的关系。 当酶以具有催化活性的构象存在时，活性中心便自然地形成。 一旦外界理化因素破坏了酶的构象，肽链伸展，活性中心的特定结构解体，酶就失去催化底物发生反应的能力，结果是酶变性失活。 酶分子中存在着一些可以与其他非底物分子发生某种程度的结合的部位，从而引起酶分子空间构象的变化，对酶起激活或抑制作用。 三、酶催化作用专一性的机理 锁钥学说的特点 锁钥学说能很好地解释酶的立体异构专一性； 但不能解释酶的可逆反应，即酶的活性中心既适合于可逆反应的底物，又适合于可逆反应的产物。 也不能解释酶专一性中的所有现象。 四、影响酶催化效率的因素 高效率 比非催化高108－1020倍 比非酶催化高107－1013倍 酶高效催化的策略 邻近效应和定向效应 诱导契合与底物的形变 酸－碱催化 共价催化 金属离子的催化作用 多元催化 活性中心微环境的影响 1 、邻近效应和定向效应 酶与底物结合形成中间复合物后，使底物和底物分子（如双分子反应）之间、酶的催化基团与底物之间相互邻近，而使活性部位上底物的有效浓度增加，从而使反应速率大大增加的效应。－－邻近效应 因为酶的特殊结构及功能，通过专一性识别，使参加反应的底物分子结合在酶的活性部位上，由于邻近效应和定向效应使得酶促反应由分子间反应变得近似于分子内反应，极大提高了反应速率。 张力学说 这是一个形成内酯的反应。当 R＝CH3时，其反应速度比 R＝H的情况快315倍。 由于-CH3体积比较大，与反应基团之间产生一种立体排斥张力，从而使反应基团之间更容易形成稳定的五元环过渡状态。 2、诱导契合与底物形变 3、 酸－碱催化(acid base catalysis) 酶分子中可以作为广义酸、碱的基团 4、 共价催化 （covalent catalysis） 酶中参与共价催化的亲核基团 Ser 的羟基 Cys 的巯基 Asp 的羧基 His 的咪唑基等 5、 金属离子的催化作用 金属离子通过3种主要途径参与催化过程： 1）通过结合底物为反应定向 2）通过可逆的改变金属离子的价数介导氧化还原反应（许多氧化-还原酶含有铜或铁离子，作为酶的辅助因子起着传递电子的功能。） 3）屏蔽底物或酶活性中心的负电荷 肌红蛋白活性中心Fe2+的作用 许多激酶的底物为ATP-Mg2+复合物 6、多元催化 酶的活性部位，一般含有多个起催化作用的基团，这些基团在空间有特殊的排列和取向，可以起到协同作用，从而使底物达到最佳反应状态，极大地提高酶的催化效能。 如：胰凝乳蛋白酶是通过Asp102, His57,Ser195组成电荷中继网催化肽键水解。 活性中心微环境的影响 酶催化的反应常常是多种催化机制的综合作用，这正是酶促反应具有高效率的重要原因。 酶作用的专一性机理 酶高效催化的策略 酶与底物在诱导契合过程中,酶受底物诱导构象发生变化, 同时酶也使底物分子中的敏感键产生“张力”和变形， 从而促使底物中的敏感键更易于破裂，发生反应。 广义酸－碱催化是指通过质子酸提供部分质子,或是通过质子碱接受部分