课内生物技术及生物化工专业综合技能培训手册正文.docVIP

第一篇：菌种相关技能 技能一 显微技术实验操作 一、显微技术的应用：1.鉴定菌种形态，初步鉴定菌种种类； 2.在微生物生产、科研工作中对操作的可靠性进行检测，如是否染菌。 二、实验目的： 掌握实验室显微镜的使用方法，能够根据实验需要运用各种染色方法进行鉴定。 三、学习重点： 观测样品的制备 光学显微镜的使用 常用染液的制备 单染色法和革兰氏染色 四、使用仪器 超净工作台、载玻片（若干），去离子水，移液枪，灭菌枪头，接种环 五、试剂 结晶紫、酒精、草酸铵、蒸馏水（或去离子水）、碘、碘化钾、番红 六、染色液配制 结晶紫染色液： 溶液A 结晶紫2.5g、酒精（95%）25.0ml 溶液B 草酸铵1.0g、蒸馏水100.0ml 将结晶紫研细后，加入95%乙醇使之溶解，配成A液；将草酸铵溶于蒸馏水配成B液，两液混合后即成。 卢哥氏碘液： 碘1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300.0g。 先将碘化钾溶解在一小部分的蒸馏水中，再将碘溶解在碘化钾溶液中，然后加入其余的蒸馏水即成。 番红染液： 番红2.0g、蒸馏水100.0ml。 七、染色步骤： （1）革兰氏染色法： 涂片——干燥——固定（不能在火焰上烤）——染色（结晶紫1min）——水洗——镜检 如果省去固定步骤，菌体的芽孢、荚膜一般都能看到 （2）细菌的单染色法 涂片——干燥——固定 初染（结晶紫1滴，约1min）——水洗 媒染（滴加碘液，覆盖1min）——水洗 脱色（用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止）——水洗 复染（用番红液染1-2min）——水洗 镜检（干燥后，置油镜观察） 阴性呈红色，阳性呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。 技能二 PH计的使用 一、实验目的: 掌握PH计的标定方法(一点标定法、两点标定法)并学会不同PH标准缓冲液溶液的配制。 二、实验原理: PH计是利用PH复合电极对被测溶液中不同的PH值产生的直流电位,通过PH前置放大器和测温传感器对被测溶液的温度测量信号叠加,并进行自动运算后输入到转换器,以达到PH值的数字显示。 PH计经过标准缓冲液校准后，即可测量溶液的PH值。 三、仪器 PHS-3B精密级数字式酸度计 100ml小烧杯三只 玻璃棒 洗瓶 250ml容量瓶三只 温度计一只 四、试剂 邻苯二甲酸氢钾、混合磷酸盐、四硼酸钠、去离子水 标准PH缓冲液的配制 1、PH 4.0邻苯二甲酸盐缓冲液 取邻苯二甲酸氢钾一小袋，溶解后用250ml容量瓶定溶到250ml即可 2、PH 6.86混合磷酸盐 取混合磷酸盐一小袋，溶解定容到250ml即可 3、PH 9.18四硼酸钠 取四硼酸钠一小袋，溶解定容到250ml即可 五、实验步骤 仪器的预热 〈1〉接通电源，把开关置于“开”的位置，预热10分钟。 〈2〉温度补偿方法 自动温度补偿法 将仪器后侧的“选择开关”置于自动，把仪器的“PH-T-mV”置于“T”，数字显示即为测温传感器测得的温度，同时仪器将温度信号送入PH-T混合电路进行运算，从而起到PH自动补偿的目的。 手动温度补偿法 拔去温度传感器，将仪器后侧的“选择开关”置于手动。把仪器的“PH-T-mV”置于“T”，调节温度调节旋钮，使数字显示值与温度计显示数值相同，仪器将该温度信号送入PH-T混合电路进行运算，从而起到PH自动补偿的目的。 仪器的标定 1一点标定法：以手动温度补偿为例 用去离子水清洗电极并用滤纸吸干，然后插入标准缓冲液中（PH=4.00或PH=9.18），将“PH-T-mV”旋钮置于“T”，调节温度旋钮使显示温度和标准液温度相同。将“PH-T-mV”旋钮置于“PH”，“斜率”旋钮顺时针旋足，调节“定位器”旋钮，使显示器数值和标准缓冲液在该温度下PH值（PH=4.00或PH=9.18） 注：仪器一点标定结束后，此时“定位”旋钮不再变动。 〈2〉两点标定法：以手动温度补偿为例 用去离子水清洗电极并用滤纸吸干，然后插入PH=6.86标准缓冲液中，将“PH-T-mV”旋钮置于“T”，调节温度旋钮使显示温度和标准液温度相同。将“PH-T-mV”旋钮置于“PH”，数字显示值为PH=7.0的标准缓冲溶液标准值。 a)如果测量的缓冲溶液为酸性，将电极从PH=6.86缓冲溶液中取出，用去离子水清洗，再用滤纸吸干，然后插入PH=4.00标准缓冲液中，调节“斜率”旋钮，使数字显示值为该温度下PH=4.00缓冲液标准值。 b) 如果测量的缓冲溶液为碱性，将电极从PH=6.86缓冲溶液中取出，用去离子水清洗，再用滤纸吸干，然后插入PH=9.1