不同样品核酸提取、扩增、荧光定量pcr完美解决方案.pptVIP

Bio-rad test * Bio-rad melting curve * * * * 所谓实时荧光定量PCR,就是实时监测PCR过程中每一个循环的产物的荧光信号，得到一个荧光变化曲线，以此来实现对初始模板的定量分析。对于这个定义，大家可能会问两个问题，第一个就是在PCR过程中这个荧光信号是怎样产生的；第二个就是得到荧光曲线后如何实现对初始模板的定量。关于第一个问题，我留在后面讲，但大家要记住一点，这个荧光信号与产物量是成正比的。 我先解释第二个问题。 * ABI比较 绝对定量 相对定量 Marisa L. Wong and Juan F. Medrano: BioTechniques July 2005 相对定量 实时检测（在对数扩增时期）而不是终点检测 敏感性高 需要样品少 特异性高（Taqman） 精确定量 Real-time qRT-PCR优点 RT-PCR原理 Real-time qPCR原理及应用 Real-time qPCR成功关键 Real-time qPCR数据分析 Real-time qPCR常见问题及解决方案 特异性 重复性 灵敏度 其他问题 常见问题讨论 扩增的特异性 引物？ Tm，重新设计引物，优化条件 Tm 重复性判断实验优劣的重要指标 判断指标：主要为标准差（SD）和变异系数（CV） 影响重复性的因素： PCR 反应扩增的效率：优