第四章 细胞培养与代谢调控_培训课件.ppt

* * 别构效应物 别构激活剂——别构激活（正反馈）——增加活性 别构抑制剂——别构抑制（负反馈）——降低活性 底物、产物或ATP、ADP、AMP等 1反馈抑制：限速酶受其代谢体系终产物的抑制。 * * * * 代谢物 别构中心 活性中心 反馈调节中酶活性调节的机制 * * 氨基酸合成的反馈调控 反硝化作用 氧化亚氮 氨甲酰磷酸 分支酸 脱氧庚酮糖酸-7-磷酸 天冬氨酸 天冬氨酰磷酸 赤藓糖-4-磷酸 脱氢奎尼酸 莽草酸 谷氨酸 磷酸烯醇式丙酮酸 + 预苯酸 Try Phe Trp Ile Trp His CTP AMP Gln Lys Met Thr 酮丁酸 Gly Ala 谷氨酰胺合酶 天冬氨酰半醛 高丝氨酸 氨基苯甲酸 协同反馈抑制 顺序反馈抑制 * * 2、产能反应与需能反应的调节 细胞能量状态指标 0.85～0.95 能荷0.85，产能（分解）代谢加强 能荷＞0.95，贮能（合成）代谢加强 糖原 葡萄糖 CO2＋H2O＋ATP 3 2 1 ATP、ADP、AMP也是一种变构剂 * * 丙酮酸 G 细胞液 柠檬酸 乙酰CoA 柠檬酸 草酰乙酸 ?-酮戊二酸 乙酰CoA 丙酮酸 线粒体 G-6-P F-6-P F-1.6-2P 磷酸果糖激酶 PEP ADP+Pi ATP ADP+Pi ATP NADH O2 ATP ADP+Pi AMP + ATP 2ADP Pi Pi PEP 羧激酶 + + + - - - + + - - - - 己糖激酶 丙酮酸脱氢酶 柠檬酸合成酶 ?-酮戊二酸 脱氢酶 糖酵解与TCA途径的调节 * * 3、酶的共价修饰和级联系统 （1）共价修饰（covalent modification）： 酶蛋白肽链上的基团在另一些酶的催化下可与某种化学基团发生可逆的共价结合，从而改变酶的活性，这种改变酶活性的调节方式～ （2）共价修饰的类型： 磷酸化/去磷酸化（最常见），乙酰化/去乙酰化 腺苷酰化/去腺苷酰化，尿苷酰化/去尿苷酰化 甲基化/去甲基化，氧化（S-S）/还原(2SH) * * * * （3）特点 修饰过程，酶活性在无活性（低活性）与有活性（高活性） 两种状态中互变 共价修饰互变由不同的酶催化 快速调节 激素信号启动的共价修饰会引起级联放大效应 * * 糖原磷酸化酶和糖原合成酶活性的调节 * * 受共价修饰调节的酶 酶 来源 改变反应 对酶活力的影响 糖原磷酸化酶 真核细胞 磷酸化/脱磷酸化 +/- 磷酸化酶b激酶 哺乳类 磷酸化/脱磷酸化 +/- 糖原合成酶 真核细胞 磷酸化/脱磷酸化 -/+ 丙酮酸脱氢酶 真核细胞 磷酸化/脱磷酸化 -/+ 谷氨酰胺合成酶 原核细胞(大肠杆菌) 腺苷酰化/脱腺苷酰化 -/+ * * （4）级联系统（cascade system）： 连锁代谢反应中一个酶被激活后，连续地发生其它酶被激活，导致原始信号的放大——级联系统。 肾上腺素→膜受体，效应器活化，引发一系列胞内连锁反应 * * 意义：由于酶的共价修饰反应是酶促反应，只要有少量信号分子（如激素）存在，即可通过加速这种酶促反应，而使大量的另一种酶发生化学修饰，从而获得放大效应。这种调节方式快速、效率极高。 * * 4、酶原与酶原激活 酶原：某些酶的无活性前体蛋白 酶原激活：无活性的酶原形成活性酶的过程 实质：活性中心的形成或暴露过程 常见形式：切下一段多余的肽段 * * 胃蛋白酶原的激活 * * 胰蛋白酶原的激活及其功能 胰蛋白酶原 六肽 肠激酶 胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶原 胰凝乳蛋白酶 弹性蛋白酶原 弹性蛋白酶 羧肽酶原 羧肽酶 水解Arg Lys 羧基形成的肽键 * * （二）酶量的调节 酶蛋白合成，降解的调节 增加酶量：增加合成，减少降解 减少酶量：抑制合成，促进降解 以基因水平为基础的调节 * * 1.酶蛋白合成： 底物诱导 产物阻遏 激素诱导 药物诱导 ——乳糖操纵子 ——色氨酸操纵子 * * 2.酶蛋白的降解 蛋白水解酶存在于溶酶体 酶蛋白的降解远不如酶的诱导和阻遏重要 泛素：与待降解的蛋白结合，由蛋白酶体进行降解 思考题 名词：细胞培养 细胞培养的操作方式有哪些？ 在分批培养中，细胞生长分哪几个阶段？ 第四章 细胞培养与代谢调控 一、细胞培养概述 细胞培养是指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌、适当条件下使其生长繁殖一种技术。细胞培养的对象是单个细胞或细胞群。 细胞培养影响的环境因素：营养、pH、渗透压、溶解氧、光照、剪切力等。 1、细胞培养发展简史及有关概念 1907年，美国生物学家哈里森将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，保持存活了几周，并观察了神经突起