第34章 DNA复制和修复.ppt

? 分子生物学的中心法则(central dogma) DNA RNA 蛋白质 一、DNA复制 （一）半保留复制（semiconservative replication） 模板 原则 特点 亲代DNA双链，每股链都可作为模板 按碱基配对原则指导新链合成 合成的两个子代DNA分子碱基顺序与亲代分子完全一样 一条链来自于亲代的DNA链，另一条链是新合成的链 （二）半不连续复制 （semidiscontinuous replication） 1、 体内仅存在5’ 3’的DNA聚合酶 2、 前导链与随从链（岗崎片段） （三）RNA引物 DNA聚合酶 不能催化两个游离dNTP在DNA模板上聚合 需要具3’-OH的引物 引物最后被DNA聚合酶Ⅰ除去、补满，再由连接酶连接 RNA聚合酶 能催化两个游离NTP在DNA模板上聚合 严格的碱基配对规律 RNA引物 聚合酶的选择作用 复制时有即时的校读功能 3’ 5’外切酶功能 DNA损伤的修复机制 (五）参与DNA复制的酶类和蛋白质 dNTP Mg++ 3’-OH引物 DNA模板 酶和蛋白质因子 DNA聚合酶Ⅲ/Ⅰ 解旋酶 单链结合蛋白(SSB） 拓扑异构酶Ⅰ/Ⅱ 引发体 DNA连接酶 1、DNA的聚合反应 DNA聚合酶Ⅰ 多功能酶 5’ 3’外切酶 3’ 5’外切酶 5’ 3’聚合酶 单链多肽（Zn2+） 大小二个片段 切除RNA引物 填补空缺 损伤后修复 DNA聚合酶Ⅲ 多功能酶 5’ 3’聚合酶 3’ 5’外切酶 不对称二聚体 单体1-前导链/单体2-随从链 DNA复制的主要酶 高续进性 高聚合酶活性 高产物真实性 DNA pol Ⅰ 合成速度太慢 持续合成能力低 影响DNA复制的基因突变与DNA pol Ⅰ无关 （2）、DNA聚合酶Ⅲ全酶（DNA Polymerase Ⅲ holoenzyme） 10种亚基组成，含锌 θαε τ γ2 δ δ’ χψ β(4个) DNA聚合酶Ⅲ全酶 真核细胞的DNA聚合酶 五种 DNA 聚合酶α DNA聚合酶δ和PCNA DNA聚合酶γ DNA聚合酶β、ε 引物的合成 前导链、随从链合成 参与线粒体DNA的合成 参与DNA的修复 （3）、DNA聚合酶Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ DNA聚合酶Ⅱ 5’ 3’聚合酶活性 3’ 5’外切酶活性 DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ(1999年以后发现） ——DNA受严重损伤时诱导产生 跨越受损部位 使复制缺乏准确性 3、DNA解旋酶及SSB DNA解旋酶（helicase） 单链结合蛋白 (SSB）   解开DNA双链每对碱基消耗2个ATP 维持单链状态 使其不受核酸酶水解 避免单链DNA自身发夹螺旋形成 使前端螺旋易解开 4、DNA拓扑异构酶 拓扑异构酶Ⅰ/Ⅲ （topoisomeraseⅠ）  拓扑异构酶Ⅱ/Ⅳ 旋转酶 （gyrase） 切断DNA双螺旋中一股，张力下降后封闭 消除负超螺旋 不需能量 切断DNA双链 引入负超螺旋 需ATP供能 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅲ  类型Ⅰ ：切断DNA双螺 旋中一股；不需能量 拓扑异构酶Ⅱα/Ⅱβ  消除正/负超螺旋 消除负超螺旋 消除正/负超螺旋 不能导入负超螺旋 5、引物酶和引发体 6、DNA连接酶 催化二段DNA链之间3’,5’ 磷酸二酯键的形成 缺口填补: 连接双股DNA分子中一链的切口 双链DNA分子中双链的切口 不能连接二分子单链DNA （三）DNA复制的过程(起始、延伸、终止） 确定复制的起始点 解开双链DNA,提供单链DNA模板 形成复制叉 DNA合成的起始和延长 形成带有新合成的DNA片段的复制泡 复制的终止 原核生物 双向复制 （θ型复制） 特定起始点：oriC 真核生物 多个复制单位（复制泡） （复制起始点+复制叉） 多个起始点 3、复制的终止 去除RNA引物 补充空缺 连接 DNA聚合酶Ⅰ的小片段 5’ 3’外切酶 DNA聚合酶Ⅰ的大片段 3’ 5’外切酶 5’ 3’聚合酶 DNA连接酶 （七）真核细胞端粒DNA的复制 真核生物的线性染色体DNA 每复制一次，子链5’有缺失 末端有特殊序列---端粒 特征: 由数百个串联重复的6核苷酸组成 人:5’-AGGGTTAGGGTT-------3’ 端粒能稳定染色体 二十世纪三十年代，遗传学家Barbava McClintock和Hermann J.Muller发现，染色体的