第十二章 核酸的生物合成21DNA的生物合成.pptVIP

第一节 DNA的生物合成 DNA的合成方式 DNA的复制：以DNA为模板合成DNA。 逆转录：以RNA为模板合成DNA。 修复合成：局部合成 第一节 DNA的生物合成 一、DNA的半保留复制 定义：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式叫半保留复制 半保留复制的实验证据:1958年Meselson和Stahl用同位素15N标记大肠杆菌DNA,首先证明。 DNA的半保留复制的生物学意义： 遗传的稳定性。 二、与DNA复制有关的酶和蛋白质 原料：dATP、dGTP、dCTP、dTTP 模板：DNA的两条链 引物：一小段RNA(或DNA） 催化因子 2、解螺旋酶 （解链酶）：通过水解ATP将DNA两条链打开。如：E.coli中的rep蛋白。每解开一对碱基需要水解2个ATP分子。 4、引物合成酶（引发酶）：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 5、DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶，其催化反应的特点 （1）以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物；（2）需要有模板的指导；（3）需要有3?-OH存在； （4）DNA链的合成方向为5 ? ? 3 ? 注意：完整的双链DNA不能作模板 原核生物中的DNA聚合酶 DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ 亚基数目 1（单体酶） ＞1（多亚基酶 ） ＞1（多亚基酶） 5’ 3’聚合活性 + + 中 + 很低 + + + 很高 3‘ 5’外切活性 + + + 5‘ 3’外切活性 + - + 每个细胞分子数 多 少 少 真核细胞内五种DNA聚合酶 （与细菌DNA聚合酶性质基本相同） α β γ δ ε 定位 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核 3‘-5’ 外切(校对) - - + + + 酶活性 功能 6、DNA连接酶：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，催化两端形成磷酸二酯键，使切口连接。 但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来。 三、DNA的复制过程：（以大肠杆菌为例） 超螺旋的松弛及双链的解开 RNA引物的合成 DNA链的延伸 切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 问题：合成的方向性？ DNA延伸方向都是 5′? 3′ 四、真核生物中DNA的复制特点 1、多个复制起点，双向复制，多复制子。 2、冈崎片段长约100-200bp(原核1000-2000). 3、DNA复制速度比原核慢。 4、染色体在全部复制完之前起点不再重新开始复制；而在快速生长的原核中，起点可以连续发动复制 5、有更多种DNA聚合酶。 6、线性染色体两端有端粒结构，防止染色体间的末端连接。由端粒酶负责新合成链5?RNA引物切除后的填补，亦保持端粒的一定长度。 端粒酶：由RNA与蛋白质组成，具逆转录酶活性，以自身RNA 为模板合成DNA(以此DNA作为引物)。 2009年诺贝尔生理医学奖：端粒的发现 2009年诺贝尔生理医学奖授予 Elizabeth Blackburn、Carol Greider 和 Jack Szostak，奖励的成就是发现了染色体端粒(telomeres)。 1970年代 Elizabeth Blackburn 和她的合作者发现了在染色体两段的端粒结构――重复的DNA序列，Jack Szostak 和她合作，先是合成拥有端粒序列的染色体，然后注入酵母细胞，证明端粒的存在可以在酵母细胞分裂的过程中，保护染色体不会丢失，因此而发现了端粒的作用。这是在1982年，2年后她当时的博士生Carol Greider发现了细胞内合成端粒的端粒酶(telomerase)。今年的诺贝尔生理医学奖就是颁给这3人。 端粒通过牺牲自己，保证了DNA序列的完整性，端粒和衰老和癌症有关 。 定义:以RNA为模板，按RNA中的核苷酸顺序合成DNA称为逆转录，由逆转录酶催化进行。 1970年Temin和Baltimore同时分别从劳氏肉