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第二节血液生化检验.
第二节 血液生化检验
血液生化检验主要用血浆和血清。目前,在临床检验中多采用检验试条或试剂盒,或干式、湿式生化仪。根据仪器的自动化程度分为全自动生化仪和半自动生化仪。血液生化检验绝大部分都是使用仪器、试剂盒或试条检验。这里主要介绍部分检验项目的自配试剂和试验步骤。
一、血糖测定
血糖指血液中的葡萄糖,正常情况下糖的分解代谢与合成代谢保持动态平衡,血糖的浓度相对稳定,病理状态下血糖浓度的改变对于判断糖代谢的异常及相关疾病的诊断有重要意义。目前常用邻甲苯胺法测定血糖。
(一)原理
己醛糖溶液在酸性与加热情况下脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛,再与邻甲苯胺缩合成芳香族第一级蓝色席夫氏碱,其颜色深浅与葡萄糖含量成正比。
(二)试剂
1.邻甲苯胺硼酸溶液:称取硫脲1.5 g溶于冰醋酸883.2 mL,再加邻甲苯胺76.8 mL,混合后加入6%饱和硼酸溶液40 mL,充分混匀,置于棕色瓶备用,可保存数月。
饱和硼酸溶液:称取硼酸6 g,溶于100 mL蒸馏水中,放置一夜过滤即可应用。
2.葡萄糖标准贮存液1mL=10 mg: 精确称取葡萄糖1.0 g,加0.25%苯甲酸安息香酸溶液至100 mL。
3.葡萄糖标准应用液1mL=1mg:用0.25%苯甲酸溶液将贮存液作10倍稀释。
(三)方法
按表2.10操作。
表2.10 操作方法 (单位:mL)
标准管 测定管
血清 — 0.1
葡萄糖标准应用液 0.1 —
邻甲苯胺硼酸试剂 5.0 5.0
置100℃水浴加温5~8 min,冷水冷却,在30 min内用520~620 nm滤光板比色,用蒸馏水做空白。
(四)计算
测定管光密度/标准管光密度×100=白糖值mg/100 mL。
(五)正常值 见表2.11。
表2.11 健康家畜血糖正常值 (mg/100 mL)
动物 平均值 变动范围 资料来源
牛 67.46 52.76~84.89 成都市乳品公司等
犊牛 60.68 60.8~108.52 成都市乳品公司等
水牛 58.02 51.0~85.0 江苏农科院
绵羊 35~60 Kaneko
仔猪断奶 90.90 48.50~133.80 山西忻县地区牧医所
马 93.00 68.00~118.00 军需大学
犬 70~100 Bloom
猫 77~118 Bloom
(六)临床诊断价值
1.血糖升高
1生理性或一时性升高 如单胃动物饲后2~4 h、精神紧张、兴奋、对动物的强制保定、疼痛以及注射可的松类药物等。
2病理性升高 见于糖尿病犬、猫、胰腺炎、酸中毒、癫痫、抽搐、脑内损伤,肾上腺皮质功能亢进、甲状腺功能亢进及濒死期等。
2.血糖降低
见于胰岛素分泌增多、肾上腺皮质功能不全、甲状腺功能减退、坏死性肝炎、肝炎后期、消化吸收不良性的胃肠炎、饥饿、衰竭症、慢性贫血、牛酮血症、母羊妊娠病、仔猪低血糖症、功能性低血糖症及毒物中毒等。
二、血清钾测定四苯硼钠比浊法
(一)原理
血清中钾离子与四苯硼钠作用,形成不溶于水的四苯硼钾,它的浊度与钾离子的浓度成正比,根据浊度可测得血清钾的含量。
(二)试剂
缓冲液;1%四苯硼钠溶液;钾标准贮存液1 mL=2 mg钾;钾标准应用液1 mL=0.02 mg钾。
(三)方法
血清0.2 mL加入重蒸馏水1.4 mL,10%钨酸钠溶液0.2 mL及2/3N硫酸溶液0.2 mL,混匀。离心沉淀,取上清液按表2.12操作。
表2.12 血清钾测定操作步骤 单位:mL
步 骤 标 准 管 测 定 管 空 白 管
无蛋白上清液 — 1.0 —
钾应用标准液1 mL=0.02 mg钾 1.0 — —
重蒸馏水mL — — 1.0
1%四苯硼钠mL 4.0 4.0 4.0
混匀,5 min后用520 nm滤光板进行光电比色,以空白管调零,分别读取各管读数。
(四)计算
测定管光密度/标准管光密度×0.02×100/0.1测定管光密度/标准管光密度×20=钾mg/100mL血清钾mmol/L=钾mg/100 mL×10/39.1
钾mg/100 mL=钾mmol/L×3.91
(五)正常值 见表2.13。
表2.13健康动物血清钾正常值(mg/100 mL)
动物 平均值 变动范围 资料来源
乳牛 19.71 16.0~27.1 西安市兽医院
水牛 20.02 13.28~24.74 扬州大学农学院
绵羊 21.07 15.24~21.11 Pugh
猪 18.88 17.20~26.19 Bertho等
马 12.91~25.11 广州部队军马防治所
犬 17.08~22.09 Robinson
猫 15.64~17.59 Albritton
(六)临床诊断价值
动物体内绝大部分钾存在于细胞内,是维
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