大鼠皮质少突胶质细胞培养条件的优化.doc

大鼠皮质少突胶质细胞培养条件的优化 杨 凯1，2，3，李一鹏4，刘英富5，程远驰1，2，3，汤锋武3，梁 冰3，徐忠伟4，陈旭义2，31锦州医科大学武警后勤学院附属医院研究生培养基地，辽宁省锦州市 121000；2武警后勤学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所，天津市 300162；3武警后勤学院附属医院，天津市 300162；4天津中医药大学，天津市 300193；5武警后勤学院，天津市 300162 引用本文：杨凯，李一鹏，刘英富，程远驰，汤锋武，梁冰，徐忠伟，陈旭义. 大鼠皮质少突胶质细胞培养条件的优化[J].中国组织工程研究，2016，2029:4328-4333. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.29.010ORCID: 0000-0002-0298-2947杨凯 文章快速阅读：文题释义： 神经胶质：是神经组织中除神经元外的另一大类细胞，分布在神经元之间，形成网状支架。其数量比神经元多10-50倍。神经胶质细胞也具有多突起，但无树突和轴突之分。胞质内不含尼氏小体和神经原纤维，没有感受刺激和传导冲动的功能。但它们参与神经元的活动，对神经元具有支持、保护、营养、形成髓鞘和修复等多种功能。 轴突：是指神经元传导神经冲动离开细胞体的细而长的突起。 摘要 背景：由于少突胶质细胞主要来自少突前体细胞，实验通过提取少突胶质前体细胞获取少突胶质细胞的过程中，选择合适的培养基和细胞接种密度对生长及形态学观察具有重要影响。 目的：对比优化少突胶质细胞的培养条件。 方法：取48 h内的SD新生鼠大脑皮质前体少突胶质细胞。分别用DMEM/高糖、DMEM/F12培养基培养少突胶质前体细胞，每组接种密度分别2×104/cm2，4×104/cm2，8×104/cm2，16×104/cm2，32×104/cm2，64×104/cm2；分别于少突胶质前体细胞贴壁72 h后，进行诱导分化，分化7 d后的少突胶质前体细胞在光镜下观察细胞形态变化并通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定。 结果与结论：DMEM/高糖、DMEM/F12 培养基以2×104/cm2，4×104/cm2，8×104/cm2接种密度时，可辨识完整少突胶质前体细胞形态。诱导分化7 d后，免疫荧光鉴定提示3组少突胶质前体细胞均可呈现髓鞘碱性蛋白阳性，F12组中2×104/cm2，4×104/cm2，8×104/cm2接种密度条件下细胞均数分别为16.40±3.30，49.95±2.33，76.95±4.86，高于相应条件下的高糖组12.65±2.53，32.10±1.17，54.05± 1.56P 0.05。结果表明，DMEM/F12较DMEM/高糖培养基适于少突胶质细胞培养，在一定范围内，少突胶质前体细胞分化为少突胶质细胞随接种密度成梯度增多，接种密度在4×104/cm2-8×104/cm2范围对观察细胞形态观察较为适合。 关键词： 组织构建；组织工程；少突胶质前体细胞；少突胶质细胞；细胞密度；培养基；分化；国家自然科学基金 主题词： 少突神经胶质；细胞，培养的；大鼠 基金资助： 国家自然科学基天津市科技支撑项目14ZCZDGX00500；天津市卫生局课题2013KZ134，2014KZ135；武警后勤学院附属医院种子基金FYM201417，FYM201432，FYM201542，WHJ座机电话号码；武警后勤学院博士启动基金WHB201417，WHB201514；武警后勤学院中心实验室开放基金2015ZXKF01 Optimization of culture conditions for oligodendrocytes of the rat cerebral cortex Yang Kai1, 2, 3, Li Yi-peng4, Liu Ying-fu5, Cheng Yuan-chi1, 2, 3, Tang Feng-wu3, Liang Bing3, Xu Zhong-wei4, Chen Xu-yi2, 3 1Postgraduate Training Basement, the Affiliated Hospital of Logistics University of Chinese People’s Armed Police Force, Jinzhou Medical University, Jinzhou 121000, Liaoning Province, China; 2Institute of Traumatic Brain Injury and Neurology, the Affiliated Hospital of Logistics University