miR―200b抑制人舌癌Tca8113细胞生长与侵袭.docVIP

miR―200b抑制人舌癌Tca8113细胞生长与侵袭 　　摘要：目的 探讨miR-200b对人舌癌Tca8113细胞的生物学功能。方法 运用MTT法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测miR-200b对人舌癌Tca8113细胞的生长、迁移和侵袭能力。结果 MTT检测发现，过表达miR-200b可抑制人舌癌Tca8113细胞的生长，具有时间依赖性；细胞划痕实验显示，转染miR-200b模拟物48 h后伤口愈合率为（56.47±3.18%）与对照组（92.26±2.31%）比能明显减缓Tca8113细胞划痕伤口的愈合，差异有统计学意义（P0.01）；Transwell侵袭实验显示，转染miR-200b模拟物36h后穿过基底膜的细胞数为（76±5）与对照组（182±11）比能明显减缓Tca8113细胞侵袭能力，差异有统计学意义（P0.01）。结论 miR-200b可抑制人舌癌Tca8113细胞生长与侵袭。 　　关键词：miR-200b；舌癌；生长与侵袭 　　microRNA是一类长度约为22个核苷酸的非编码RNA小分子，通过与靶基因mRNA的3UTR区域完全或不完全结合，从而调控相关靶基因的表达[1]。目前miR-200b在肿瘤中的研究如火如荼，在多种恶性肿瘤中，如在胃癌、乳腺癌、胶质瘤以及非小细胞肺癌中表达下调，类似抑癌基因样作用[2-5]。然而目前关于miR-200b在舌癌中的表达情况以及生物学功能尚未见任何文献报道。本研究采用MTT，划痕实验，transwell侵袭实验首次分析miR-200b在人舌癌Tca8113细胞中的生物学功能，为进一步探讨舌癌发生发展的分子机制提供实验依据。 　　1实验方法 　　1.1 MTT法 消化培养瓶中预先培养的舌癌Tca8113细胞，收集离心并计数，取200 μL即5×103个细胞接种于96孔板中，设复孔6个，置于细胞培养箱中培养24～48 h后取出，每孔加入灭菌MTT液（5 mg/mL）20 μL，培养箱中继续孵育4 h。再加入150 μL DMSO溶液，低速振荡10 min，选择570 nm波长，酶标仪测定各孔吸光度值，记录结果，实验重复3次。 　　1.2划痕实验 将舌癌Tca8113细胞接种于6孔板中培养，待长至临近饱合。用无菌10 μL Eppendorf Tip在细胞板上划痕，于倒置显微镜下分别观察各组细胞0 h，24 h，48 h的划痕距离，并摄像。软件测量各孔细胞任意3个部位的不同划痕距离，并计算各组伤口愈合率，计数三组实验的平均值，并进行统计分析。 　　1.3 Transwell侵袭实验 在8 um的transwell小室中铺加50 μL基质胶稀释液，放置于37℃培养箱中，过夜以成膜，取100 μL即每孔1×105个细胞/mL接种至transwell小室的上腔，另下腔中加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液500 μL。置于培养箱中培养36 h。取出transwell小室，4%多聚甲醛固定细胞，0.1%结晶?染色。光学显微镜下观察并摄相，随机选取4个视野进行细胞计数，取平均值，实验重复3次。 　　1.4统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。所有结果均以均数±标准差（x±s）表示。两组间比较用t检验，多组间比较用单因素方差分析，当P0.05时，为差异有统计学意义。 　　2实验结果 　　2.1 MTT法检测miR-200b对人舌癌Tca8113细胞生长的影响 为确定外源性高表达miR-200b对舌癌Tca8113细胞增殖的作用，将miR-200b模拟物转染于Tca8113细胞中，转染miRNA的无关序列用于阴性对照。转染miR-200b模拟物48 h、72 h、96 h后，舌癌Tca8113细的增殖能力显著抑制，对照组相比差异具有统计学意义（P0.05）。表明高表达miR-200b能明显抑制舌癌Tca8113细胞增殖。 　　2.2划痕实验检测miR-200b对人舌癌Tca8113细胞迁移能力影响 划痕结果显示，转染miR-200b模拟物48h后伤口愈合率分别为（56.47±3.18%）与对照组（92.26±2.31%）比较明显减缓，差异均有统计学意义（P0.01）。表明高表达miR-200b能明显抑制舌癌Tca8113细胞的迁移能力。 　　2.3 Transwell侵袭实验检测miR-200b对人舌癌Tca8113细胞侵袭能力的影响。Transwell结果显示，转染miR-200b模拟物36 h后穿过基质胶的细胞数量分别为（76±5），与对照组（182±11）相比，差异具有统计学意义（P0.01）。表明高表达miR-200b能明显抑制舌癌Tca8113细胞的侵袭能力。 　　3讨论 　　舌癌是常见的口腔颌面部恶性肿