Neuromedin U对小鼠DRG神经元T型钙离子通道的作用及机制的研究.docVIP

苏州大学 硕士学位论文 Neuromedin U对小鼠DRG神经元T型钙离子通道的作用及机制的 研究 姓名：王芬 申请学位级别：硕士 专业：神经生物学 指导教师：蒋星红；陶金 201110  ????? ?? 究表明，??员掣?窬?谙赴?系腡型钙通道的抑制作用具有剂量依赖关系。 咳毒素??瓒希?砻鱊?是通过?瞐亚基发挥作用。运用设置去极化前置脉 ?????虲??????????则无此效果。??赴?朔苄匝芯糠⑾郑琋?  ????? ??甤??????? ??? ??? ?? ????? ??? ?? ????篗???? ?????? ? ??????? ?? ????甌? ? ??????????? ? ????． ????? ??? ?? ??甤?????????????鹊??觞???? ??? ????? ?? ?????????％．?? ????? ? ???·????甎???????????? ?????鵶????咖???? ????? ??? ??琣 ????? ?????? ?州?甆??弘?????? ??? ???????? ¨  ????? ??????篘? ????????? ????? ? ??． ????：????? ?????? ? ?? ????? ? ????  ????? 言 前叶、脑和脊髓中表达最多【?俊??具有多种生理学作用，主要有平滑肌的收缩、 ??也集中表达在脊髓一层和 二层的外侧面，这个部位是中枢伤害性感受通路的重要组成部分。最近有研究显 中发挥作用【?????? ??????，??中包含了从痛觉感受器传入的初级神  ????? 害性感觉相关?????，所以我们在实验中只研究记录小直径神经元。 ????產???? 钙浓度、静息膜电位、动作电位的簇状放电以及痛觉的传递中有着重要的调节作 通道在急性外周痛觉信号传递中的重要作用目前已通过药理学?嵫?⒎肿由?镅?冽 ??窒蟮男纬伞Ｓ泻芏嘌芯空弑ǖ迹琓型钙通道表达于小直径?????? 的背根神经节细胞，而离体实验也证实了其的确存在于作为伤害感受器传入的初 ???????窬?猅型钙电流的作用，并用药理学方法研究其作用机制及 信号转导通路；最后观察??訢?神经元兴奋性的作用。通过本实验的研究，  ????? 材料和方法 ????种萍? 胎牛血清 杭州四季青 ??昙堑难蚩剐∈驣?的二抗 ??  材料和方法 ????? ??公司 ??公司 ??公司 ??公司 ???公司 ???公司 ???公司 ????? ???? ??? 蠕动泵 ?计 ???? 水平电泳槽 ??甊?公司 葡萄糖 用装有????滤膜的灭菌滤器过滤除茵，过滤好的培养基分装于无菌容器中， ?  ????? 葡萄糖 ??? 用双蒸水定容至??? ?? ?? ??缬净撼逡?????? 甘氨酸 加去离子水???蠼涟枋怪?芙猓?门ㄑ嗡岬鹘趐?抵?．??詈蠖ㄈ葜罸???。 ????缓冲液 双蒸水 用浓盐酸调节?值至??，然后定容?????。  材料和方法 ??转膜缓冲液 ???％聚丙烯酰胺分离胶 ???ゾ郾??０放ㄋ踅??? 双蒸水 ??? ? ? ? ? ? ?  ????? ? ?? ? ? 用???调?至?????秆沟髦?? 到几个?? ? ?管中，．?℃中保存备用。 ???神经元原代培养 取??艿某赡闕?小鼠，颈椎脱臼处死，剪去头部，?％酒精消毒，从背侧 取出脊柱子预冷的??中，沿脊柱背面取出双侧椎管??甃?内的背根神经节 ????诳墒酉晕⒔馄示迪掠镁?改髯雍图舻都舫?宋?橹??．?％胶原酶消 化???，??％胰酶消化???????、牛血清的??终止消化，经粗细吸  材料和方法 ????? ???甈?检测??蠳?受体的表达 于冰上?????橹?浞至呀夂蠹尤?．??确拢?缌艺鸬??后放冰上??， 后，加入?山??处理过的水溶解沉淀?颍??姹４?，然后用分光光度计测 ??水的?反应液于??， ?逆转录酶，总体积??， ?℃????心孀B迹??婷鸹蠲???。??用于??聚合酶链式反 所有的引物都经过???  ????? 材料和方法 ????未笮。??? ????? 下游引物：??瓵??????从????’； ????????篘?? ? ? ? ? ? 上游引物? ? 下游引物? ● ??? ? 双蒸水 ???锊⒓????? ??? ????? ??取??周龄的??、鼠??甃?的背根神经节，在可视显微镜下将组织剪 ?  ????? ??配置?％分离胶和?ヅㄋ踅海?急窼?．??电泳 ??用湿法电转法将凝胶上的蛋白带转移至???膜上，恒流?????? ?瞬街璧迷诒?≈型瓿?。 ??洗涤??膜?危?