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研究HPLC法测定红霉素明胶微球的含量 　　[摘 要]目的 建立红霉素明胶微球中红霉素含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为DIKMA C18色谱柱（5μm，250mm×4.6mm），流动相为0.1mol/L磷酸二氢铵（三乙胺调节至pH6.5）乙腈（体积比67∶33），流速1mL/min；检测波长210nm。结果 红霉素质量浓度在0.0992～0.4960mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.9999；平均回收率为100.1%，RSD=0.95%（n=9）。结论 本文方法可用于红霉素明胶微球的含量检测。 　　[关键词]红霉素明胶微球；高效液相色谱法；紫外分光光度法 　　中图分类号：TH552 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0313-01 　　红霉素（erythromycin）是临床上应用广泛的抗生素，是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物，但在体内分布广泛，有效治疗浓度维持时间短，容易诱发耐药性，且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反应。 　　红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体，是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球。中国药典（2005年版）中红霉素的含量测定采用微生物检定法，此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差。文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等。 　　本文作者曾采用紫外分光光度法测定红霉素微球的含量，取得良好效果。本文采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量，并对2种方法进行统计分析，检验2种方法的差异性。 　　1 仪器与试药 　　岛津LC10ATVP高效液相色谱仪（SHIMADZU COPRPORATION），紫外SPD10Avp检测器（SHIMADZU COPRPORATION），HW色谱工作站。pHS25pH计（上海精密科学仪器有限公司），超声波清洗器（天津市考德斯科技有限公司）。 　　红霉素标准品（中国药品生物制品检定所，批号30307200215），乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。红霉素明胶微球（简称EMGMS，自制，批号200608122006082020060828）。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱： DIKMA C18柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢铵（三乙胺调节pH 6.5）乙腈（体积比67∶33）；流速1 mL/min；检测波长：210 nm。 　　2.2 溶液的配制 　　精密称取红霉素标准品49.6mg置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为0.992mg/mL的标准品溶液。 　　精密称取红霉素明胶微球172.3mg（约相当于红霉素23mg），充分研磨，显微观察微球完全破坏后，置于容量瓶中加流动相至刻度，超声30min，放冷，用流动相定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，制成供试品溶液。 　　精密称取空白明胶微球172.4mg，充分研磨，按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶液。 　　2.3 系统适应性及方法专属性试验 　　在选定的色谱条件下，分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液。红霉素拖尾因子为1.26、保留时间约13.1min，理论塔板数按红霉素计算不低于1000，与其他组分可基线分离，阴性样品不干扰样品测定。 　　2.4 标准曲线 　　分别精密量取标准品溶液1、2、3、4、5mL置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别取20μL进样，记录色谱峰峰面积。以峰面积（A）为横坐标，质量浓度（ρ）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：ρ=0.3×10-4A+0.28×10-2，r=0.9999。结果表明红霉素的质量浓度在0.0992～0.4960mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。 　　2.5 稳定性试验 　　取供试品溶液在室温放置，分别于0、2、4、6、8、10h进样，记录色谱峰峰面积，RSD为0.86%，表明样品溶液在10h内稳定。 　　2.6 精密度试验 　　取对照品溶液，于10h内不同时间重复进样5次，记录色谱峰峰面积，RSD为1.41%，表明精密度良好。 　　2.7 回收率试验 　　精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液9份，加入一定量的红霉素对照品，配制成高、中、低3种质量浓度的溶液，按“2.2”项方法制成供试液，进样测定，计算回收率，结果平均回收率为100.1%，RSD值为0.95%（n=9）。 　　2.8 重复性试验 　　取同一批微球（批号5份，按“2.2”项方法制成供试液，进样，记录