项目10标本中未知细菌的分离和鉴定.docVIP

项目10：标本中未知细菌的分离和鉴定 【目的要求】】直接涂片、革兰染色、镜检（形态、排列、染色性） 脓、痰、咽拭子 分泌物、脑脊液 观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板→ 涂片、染色、镜检 ↑ 挑取可疑菌落 生化反应 血液、穿刺液 →肉汤培养基 纯分离 致病性测定 ↓ 药敏试验 如培养液混浊时可涂片、染色、镜检 （三）常见临床标本的检查方法 1．脓拭子 在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。 【材 料】 法】 料】 法】 料】 法】 伊红美蓝琼脂平板 ↓ 双糖铁培养基 ↓ ↓ 多价诊断血清凝集试验 可疑菌落做生化反应 （初步鉴定） (1)取标本拭子涂布伊红美蓝琼脂平板上，再以灭菌接种环划线分离，置37℃培养。标本置4℃冰箱保存，待报告发出后再废弃。 (2)取伊红美蓝琼脂平板观察有无半透明、较小的可疑菌落，挑选单个可疑菌落接种于半固体双糖铁培养基上(每一标本应接种1支～2支双糖铁培养基)。 (3)观察细菌在双糖铁培养基上生长情况 ①葡萄糖产酸产气、乳糖分解、动力有或无者，初步鉴定为大肠杆菌。 ②葡萄糖及乳糖均不分解而有动力者，初步鉴定为粪产硷杆菌。 ③葡萄糖产酸产气、乳糖不分解、没有动力者，初步鉴定为副大肠杆菌。 如属上述三种情况，不必再继续鉴定。 ④葡萄糖产酸、产气或不产气，乳糖不分解、动力为阳性者，可能是沙门菌，可用伤寒、副伤寒诊断血清作玻片凝集试验,凝集则初步鉴定为沙门菌。如必要时再作进一步鉴别，即将双糖铁培养基上之细菌接种于葡萄糖、麦芽糠、乳糖、甘露酵、蔗糖、阿拉伯胶糖、木胶糖、鼠李糖、糖、卫予醇发酵管、蛋白胨水、醋酸铅培养基、尿素培养基，经37℃培养后，根据该菌的生化反应结果，再与有关的“O”因子血清作玻片凝集定组，最后以“H”因子血清作玻片凝集定型。 ⑤葡萄糖产酸不产气、乳糖不分解、无动力时可能为痢疾杆菌，自双糖铁培养基斜面上取菌分别与志贺痢疾杆菌诊断血清、福氏痢疾杆菌多价诊断血清、鲍氏痢疾杆菌多价诊断血清、宋内痢疾杆菌诊断血清作玻片凝集，以定菌群；如必要时可分别用因子血清定菌型，也可以生化反应（甘露醇、乳糖、卫予醇、山梨醇、蛋白胨水）结果证实之。 项目说明：本实验为综合性实验项目，学生在实验过程中综合应用细菌分离培养技术、革兰染色技术、显微镜技术、无菌操作技术、细菌鉴定技术等微生物学基本实验技术，通过此实验，学生熟悉了临床标本中未知细菌的分离培养与鉴定程序，在实验过程中着力培养学生观察问题、分析问题、解决问题的能力，培养学生的独立工作能力和发现问题的能力，强化学生的实践能力和创新意识，并通过实验报告的书写，进一步规范实验报告的书写格式，从而提高课程教学质量，实现课程培养目标。