北冬虫夏草子实体色素的分离和提取课件.pptVIP

北冬虫夏草子实体色素的分离和提取 生工082 杨林林 导师： 孙思清 北冬虫夏草又称蛹虫草，与我国名贵中药材冬虫夏草为同属异种，属于真菌界子囊菌门麦角菌科虫草属。 其药理功能主要表现为对哮喘和支气管炎具有很好的疗效，而且具有增强肾功能等的作用。 作为冬虫夏草的替代品之一，北冬虫夏草具有与冬虫夏草相似的活性成分和医疗保健功效，大量研究表明，其主要活性成分虫草素的含量．是野生冬虫夏草的数十倍，腺苷含量也高出冬虫夏草数倍。 北冬虫夏草子实体色素 采用固体发酵人工培养的北冬虫夏草子实体具有金黄的色泽，是其重要的生理功效成分之一 对其色素成分的研究仅见报道蛹虫草中含有类胡萝卜素（付鸣佳 2005，张志军等 2007），但未进行纯化和结构鉴定。对人工培养蛹虫草中天然色素进行研究将有可能从虫草属真菌中寻找到功能天然色素，为虫草更多方面的开发利用提供理论依据。 色素的提取 虫草色素不溶于乙醚、乙酸乙酯等非极性溶剂,易溶于甲醇、乙醇、水等极性溶剂。 称取0.5 g 粉碎的北冬虫夏草干粉,分别置于250mL具塞锥形瓶中，加入50 mL 不同极性的溶剂中（水、30 ％乙醇、50 ％乙醇、80 %乙醇、甲醇、乙醚、乙酸乙酯）,于室温下超声振荡提取40 min,观察提取液颜色，在波长448 nm 处测定吸光度。 子实体虫草素的检测 高效液相色谱法（HPLC）、毛细管区带电泳(CZE) 毛细管电泳技术（CE ）、 液相色谱、质谱联用技术（LC／ESI-MS）。 本次实验采用高效液相色谱法。通过对比提取溶剂、料液比、温度、pH 值及时间对提取蛹虫草中色素的影响，以确定色素提取最佳工艺参数。 确定对色素提取率影响较大的3个因素设计正交试验，最终确定最佳条件。 单因素实验 提取溶剂筛选择：分别称取约1 g 蛹虫草子实体干粉10 份，分别置于50mL 具塞容量瓶，平行两份中分别加入蒸馏水和30%、50%、70%、90%乙醇40 mL，摇匀后密封于70℃水浴加热3 h，冷却后用蒸馏水定容至50 mL，摇匀过0.45 μm 微滤膜后上 机，测定蛹虫草色素的含量。每个溶剂梯度两个平行样结果取均值。 提取料液比筛选：分别称取约1 g 蛹虫草子实体干粉10 份，分别按1∶ 10、1∶ 30、1∶ 50、1∶ 70料液比平行两份加入相应体积蒸馏水，摇匀后密封于70℃ 水浴加热提取3h，冷却后用蒸馏水定容至50 mL，摇匀过0． 45 μm 微滤膜后上机，测定蛹虫草色素的含量。 提取温度筛选分别称取约1 g 蛹虫草子实体干粉10 份，分别置于50mL 具塞容量瓶，分别加入40mL 蒸馏水摇匀，密封后分别置于50、60、70、80、90℃加热提取3h，冷却后用蒸馏水定容至50mL，摇匀过0． 45 μm 微滤膜后上机，测定蛹虫草色素的含量。 浸提时间筛选：分别称取约1 g 蛹虫草子实体干粉10 份，分别置于50mL 具塞容量瓶，加入40 mL 蒸馏水摇匀，密封后置于70℃水浴，平行两份分别浸提1、2、3、4 h，冷却后用蒸馏水定容至50 mL，摇匀过0． 45 μm 微滤后上机，测定蛹虫草色素的含量。 提取pH 值筛选：分别称取约1 g 蛹虫草子实体 干粉10 份，分别置50 mL 具塞容量瓶，加入40 mL 蒸馏水，平行两份分别调pH 值为3、5、7、9、11，摇匀后密封，于70℃水浴加热浸提3 h。冷却后用蒸馏水定容至50mL，摇匀后过0． 45 μm 微滤上机，测定蛹虫草中色素含量。 响应面试验 通过对单因素试验结果进行分析确定影响较大的3个 (分别表示为A,B,C) 因素实验，以确定其最佳提取条件。 响应面实验涉及复杂公式不详细介绍了。 * * 根据结果选用80%乙醇作为提取剂 *