枯萎病生防菌短短芽孢杆菌（Brevibacillusbrevis）J2菌株的培养.docVIP

短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）JK-2菌株抑菌活性物质 产生条件的优化 郝晓娟1，2 刘波1* 谢关林2葛慈斌1 周先治1 （1.福建省农业科学院生物技术，福州 350003 ；2.浙江大学农业与生物技术学院，杭州 310029） 摘要：短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）JK-2菌株对多种植物病原真菌和病原细菌都具有明显的抑制作用。本文以JK-2发酵液对番茄枯萎病菌的抑制作用作为活性指标，对其培养基成分和培养条件进行了优化。由正交试验和单因素试验得出的最佳培养基配方为淀粉1.0%、牛肉浸膏0.5%、蛋白胨0.3%、蔗糖1.0%、酵母粉0.5%、CaCl20.5%，初始pH7.0。在30℃、170r振荡培养条件下，最佳发酵时间为48h，装液量100ml/瓶，接种量1%。 关键词：拮抗细菌 短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）物质 培养条件 优化 中图分类号：S476.8HAO Xiao-juan1,2, Liu Bo1*,XIE Guan-lin2*, GE Ci-bin1，ZHOU Xian-zhi1 (1. Biotechnology Institute，Fujian Academy of Agricultural Sciences，Fuzhou， 350003China 2. College of Agriculture and Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China) Abstract: Brevibacillus brevis JK-2 strain can produce antibiotic substances being strongly antagonistic to various plant pathogenic fungi and bacteria, such as F. oxysporum f. sp. radicis lycopersic etc. In this study, single-factor design and multiply-factor design were used for optimizing culture conditions of B. brevis JK-2 strain. The results showed that optimal cultural media for antibiotics production included 1.0% starch, 0.5% beef extract, 0.3% peptone, 1.0% sucrose, 0.5% yeast extract and 0.5% CaCl2, initial pH 7.2. The optimal cultural period was 48h at 30℃ in 250-ml shake flask at 170r/min. The aeration ratio was 100 ml, and the inoculation volume was 1%. Key words: antagonistic bacterium, Brevibacillus brevis, antibiotic substance, culture conditions, optimization 芽孢杆菌(Bacillus spp.)在自然界广泛存在，可以产生抗生素[1，2]、细菌素[3]、细胞壁降解酶类和其它抗菌蛋白[4]及挥发性抗菌物质[5]。芽孢杆菌作为革兰氏阳性细菌，可以形成芽孢，环境适应性优良，细胞壁不含内毒素，绝大多数对人畜无毒，是很有价值的生防因子[6] 。短短芽孢杆菌Brevibacillus brevis（前称为短芽孢杆菌 Bacillus brevis ）[7]在生物防治中的应用国内外均有报道[8-16]。该菌的抑菌机理主要是可以产生短杆菌肽[8]、几丁质酶[9]等活性物质。Edwards SG等的试验表明[8]，B. brevis Nagano菌株的抑菌作用与短杆菌肽S的含量成正相关，但是单纯依靠该菌并不能在实际应用中有效地控制白菜灰霉病，除非加入可以诱导产生大量短杆菌肽S的介质。 B. brevis JK-2 菌株是本实验室分离筛选到的一株对多种病原菌具有拮抗活性的细菌，在对多种病原真菌表现出了抑制活性，在盆栽试验中，该菌可以有效地抑制番茄枯萎病的发生（另文报道）。在前期的试验中发现该菌至少产生3种不同的活性物质，具有良好的开发前景和研究价值。为提高其活性物质的产量，本试验运用正交试验及单因素试验对培养基进行了优化，