Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用课件.ppt

4小时后，脲苷的出峰时间没有变化，说明固定相很稳定。否则会出现疏水塌陷，导致没有保留。疏水塌陷及硅胶表面不浸溶导致 碱性化合物阿米替林在不同pH下的保留行为：3.559、10.963、 * 普通C18由于活性硅羟基的影响------- Mp-c18-2即对羟基去活有保留了亲水性 总结：亲水、通用、良好的分离能力。适合研发部门使用 * 经典的反相C18柱 进样500针后，测试效果没有变化。 重点介绍耐污染性，投入市场后反应很好 * 碱性化合物在低pH下不稳定，无保留。在较高的ph值下样品中的酸性、中性和碱性化合物保留因子差别较大，可以一次性达到分离的效果。 * 推出表面杂化技术，表面杂化就像是给马蹄加上了铁掌，增加了硅胶在高ph范围的耐受性。 表面杂化即使用一定比例的更加稳定的c-c键代替碱性不稳定的o-si键。 * Ph12下冲12小时，保留时间及选择性毫无变化 * 客户故事：公司经验ph=1.5，客户在ph=0.8仍然ok * * 这是一个应用实例 * 介于反相与正相的色谱 介绍产生背景，对强极性样品：反相无保留；正相样品溶解是问题，强保留，洗脱是问题（正相流动相常常是弱极性） Hilic使用反相流动相，分离机理与正相相同。例如可使用乙腈：水，而与反相不同的是乙腈比例越大，样品保留越强 * * 国内唯一可以做的厂家， 这张图是解释为什么Bonshell的柱压低、柱效高。 1、柱压低：2.7μm和1.9μm比较，前者颗粒大，填料之间的空隙大，导致同样流速的流动相经过时，压力低。 2、柱效高：以5μm和2μm为例，目标物在5μm的单个球中走的路径复杂，有的路径短，有的路径长，导致峰型扩散；而目标物在2μm中，由于球的粒径小，微孔的数量比5μm的球少，目标物走的路径的长短差异变小，峰型扩散不严重，所以峰型窄，柱效高。同样的道理，2.7μm由于内部是实心球，微孔数量少，相当于2μm的微孔数量，路径也短。因而柱效和2μ差不多。 相似的柱效却只有60%的柱压，可以在普通液相上实现uplc的效果 * 在800bar以内，只要仪器可以，流速可以加到2.5甚至以上，而柱效几乎没有损失 * 1 特别注意NH2和HILIC 2 不互溶时柱压偏高 3 压力稳定后时为标记 5 离子对试剂时40-50倍，最好实验前一天晚上低流速冲一晚上 6 色谱柱使用完后要正确的冲回保留溶剂 归类：样品的性质，样品的基质（干净、发酵、注射液、胶囊、片剂） 大多分析柱都是peek的，制备可能需要注意 柱内体积为近似值，随各家柱管和填料稍有变动。 ?保护柱和柱子的寿命是相同的。例如比较干净的样品色谱柱的正常寿命是1000针，那么加上保护柱芯最长可以用到10000针以上；而有的客户发酵液样品可能几十针柱子就会废掉，保护柱是必不可少的。 流动相：由弱变强 地西他滨和杂质的分离 色谱柱: Venusil HILIC 4.6×150mm, 5μm， 流动相: ACN:H2O＝96:4; 1ml/min; UV: 244nm; room temp Agela 极其丰富的键合相 各种专用柱（阿奇霉素专用柱、左卡尼丁专用柱、糖柱…） 定制色谱柱（期待与您合作，开发属于您的专用柱） 超高效液相色谱技术——UHPLC 色谱柱/Core-shell 色谱柱 UHPLC色谱柱 1.9μm粒径： 比1.7μm压力低，耐污染 耐压800bar 键合相： UHP ASB C18 UHP AQ C18 UHP C18 Bonshell填料技术 内部为1.7 um实心球 外部为0.5 um多孔外壳 耐污染: 粒径大同时物质不会进入硅胶实心球内部造成堵塞，较全多孔颗粒寿命更长。 耐高压: 1.7 um实心球较普通3 um硅胶更高的耐压性，耐压到 800bar (12000 psi), 为高流速分离提供支持。 填料粒径对色谱柱柱效的影响 保持与1.9μm色谱柱相同分离速度和效果，却维持较低的系统压力 Bonshell- 缩短了保留时间 样品:太古霉素 5μm传统C18, 流速:1.0mL/min 2.7μm Bonshell ASB C18 流速: 2.5mL/min 流动相: 乙腈: 1%甲酸=32: 68 UV: 254 nm 流速: 1.0 mL / min. 30°C 进样量: 5 μL 响应时间: 4.0秒 响应时间: 2.0秒 响应时间: 1.0秒 响应时间: 0.5秒 响应时间: 0.1秒 尿嘧啶 乙酰水杨酸 N-乙酰苯胺 Uracil Acetylsalicylic acid Acetanilide 缩短检测器响应时间，可增加柱效（提高灵敏度） 检测器的响应时间对分离度的影响在UHPLC上值得重视