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利湿退黄胶囊质量标准研究 　　【摘 要】 目的：建立利湿退黄胶囊的质量控制方法。方法：采用TLC法鉴别方中的栀子和虎杖，采用HPLC法测定虎杖苷的含量。结果：在TLC色谱中可检出栀子、虎杖的特征斑点；虎杖苷在0.1350～0.6750μg （r=0.9995），平均回收率为100.56%（RSD1.14%，n=6）。结论：所建立的方法能够准确可靠地进行定性、定量检测，重复性好，适用于利湿退黄胶囊的质量控制。 　　【关键词】 利湿退黄胶囊；虎杖苷；栀子；高效液相色谱法 　　利湿退黄胶囊为濮阳市某医疗机构协定处方，由虎杖、栀子、苦参、黄芩、夏枯草、泽兰、女贞子、五味子、赤芍等药组成，具有清热解毒、利湿退黄的功效。主治急性活动期乙型肝炎。本品临床疗效肯定，但原质量标准较简单，不能准确把握产品内在质量。本实验采用薄层色普法（TLC）对方中的虎杖和栀子进行了薄层鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）测定虎杖中虎杖苷的含量，建立了简便可行、准确可靠的质量控制标准和方法。 　　1 仪器与试药 　　Agilent 1260 高效液相色谱仪，配有四元梯度泵和Agilent chemstation 数据工作站；Sartorius CPA 225D 分析天平，编号栀子对照药材（批号120986-200805）、虎杖对照药材（批号120980-200804）、虎杖苷（批号：111575-200301）均购自中国药品生物制品检定所。利湿退黄胶囊（规格每粒0.35g，批号121125， 121210，130114）及阴性对照品均由濮阳市某医疗机构制剂室提供；乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 薄层鉴别 　　2.1.1 栀子的薄层鉴别 取本品内容物5g，加乙醇50ml，置水浴加热回流2h，滤过，滤液置水浴蒸干后加水20ml溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚层，再用正丁醇提取4次，每次10ml，合并正丁醇，再用水提取4次，每次10ml，合并水溶液，置水浴蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。同法制得栀子阴性对照溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；阴性对照无相应斑点（见图1）。 　　2.1.2 虎杖的薄层鉴别 取本品内容物5g，加氯仿30ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制得虎杖阴性对照溶液。另取虎杖对照药材0.5g同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；阴性对照无相应斑点（见图2）。 　　2.2 虎杖苷的含量测定 　　2.2.1 色谱条件 色谱柱： Venusil MP C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（25：75）为流动相；流速为1.0mL/min。柱温30℃，检测波长为306，理论塔板数大于 3500。在此条件下，虎杖苷与相邻组分均能达到完全分离。 　　2.2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取虎杖苷对照品13.50mg，加稀乙醇制成浓度为0.1350mg/ml的溶液，作为对照品储备溶液，备用。取上述对照品储备溶液2ml至10ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，即得每1ml含虎杖苷0.0270mg的对照品溶液（避光操作）。 　　2.2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物研细，取约0.5g，精密称取，置烧瓶中，加入稀乙醇25ml，称定重量，加热回流30min，放冷，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取不含虎杖药材的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液（避光操作）。 　　2.2.4 测定方法 分别吸取对照品溶液、样品溶液和阴性对照品溶液各10ul，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，以外标法分别计算虎杖苷的含量。 　　2.2.5 阴性对照品的测定 取不含虎杖药材的阴性样品，按“2.3”项方法操作，得阴性对照溶液。依法测定，结果表明阴性液无干扰。 　　2.2.6 方法学考察 　　2.2.6.1 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液各5、10、15、20、25ul，按上述色谱条件进行测定，以进样量