小檗碱对脂肪胰岛素抵抗细胞PPARγ及脂肪分泌因子表达的影响.docVIP

小檗碱对脂肪胰岛素抵抗细胞PPARγ及脂肪分泌因子表达的影响 　　[摘要] 脂肪分泌细胞因子与脂肪组织胰岛素抵抗（IR）密切相关，在糖尿病的发生发展研究中越来越受到重视。该实验主要研究小檗碱对脂肪胰岛素抵抗（IR）细胞PPARγ和脂肪分泌因子mRNA表达的影响，探讨小檗碱增强胰岛素敏感性的分子机制及微滴数字PCR（ddPCR）方法的应用优势。该实验采用ddPCR绝对定量分析简单直观确定合适的内参基因，ddPCR和荧光定量法（qPCR）方法比较研究不同剂量（10，20，50，100 μmol?L-1）小檗碱干预IR 3T3-L1脂肪细胞中PPARγ、脂联素、抵抗素和瘦素mRNA表达；加入GW9662研究PPARγ和脂联素mRNA表达的内在关联。ddPCR结果发现β-actin 在脂肪细胞中表达稳定，适合作为内参基因对定量PCR数据标准化。ddPCR和qPCR方法均显示与IR模型组相比，10，20，50，100 μmol?L-1小檗碱呈现剂量依赖降低脂联素mRNA表达（P0.01）。对于PPARγ，qPCR显示20，50，100 μmol?L-1小檗碱呈现剂量依赖降低其表达（P0.01），而ddPCR仅在50，100 μmol?L-1降低其表达（P0.05）。PPARγ特异拮抗剂GW9662干预实验表明脂联素基因表达受PPARγ直接调控（P0.05）。ddPCR探针法检测到各剂量