肾康冲剂联合厄贝沙坦对单侧输尿管梗阻肾间质纤维化的影响.docVIP

肾康冲剂联合厄贝沙坦对单侧输尿管梗阻肾间质纤维化的影响 　　【摘 要】目的：观察肾康冲剂联合厄贝沙坦对肾间质纤维化的防治作用及其效果。方法：75只雄性清洁级（Sprague　Dawley　SD）大鼠，用单侧输尿管梗阻（Unilateral　Ureteral　Obstruction UUO）模型，随机分为五组：假手术组、模型组、厄贝沙坦组、肾康冲剂组、厄贝沙坦联合肾康冲剂组，每组15只。治疗组分别给予肾康冲剂（300mg，kg-1，d-1）、厄贝沙坦粉末（10mg，kg-1，d-1）、及二者联合灌胃治疗。假手术组及模型组予相应量生理盐水灌胃治疗。于给药后第3，7，14d分别观察梗阻侧肾组织病理学的改变及测定肾组织中TGF-β1、NF-KB、α-SMA的表达、肾组织胶原蛋白（ug）／肾重（?）之比。结果：与假手术组相比，模型组中肾间质水肿，单个核细胞浸润，肾间质纤维组织相对面积显著扩大，TGF-β1、NF-　?B、α-SMA的表达及肾组织中胶原蛋白含量表达明显上调（P0.05）。结论：肾康冲剂能够减少UUO大鼠肾间质炎性细胞浸润，减少肾间质胶原蛋白的含量，有防止UUO大鼠肾间质纤维化的作用，肾康冲剂和厄贝沙坦两者合用抗肾间质纤维化有协同作用。 　　【关键词】肾康冲剂；病理学改变；防治；肾间质纤维化 　　【中图分类号】R693；R692.9 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）01-0092-02 　　肾间质纤维化（renal　Interstitial　fibrosis，RIF）的程度与肾脏疾病慢性进展速度和患者预后密切相关。为了进一步明确肾康冲剂对RIF的防治作用及其效果，本文进行了以下研究。 　　1　材料与方法 　　1.1　单侧输尿管梗阻模型的建立与分组：①模型建立：雄性SD大鼠共75只（河北医科大学动物实验中心提供合格证号：DK04O4-0036，DK0405-002），体重180-220克，模型组和治疗组按左侧输尿管结扎术，建立大鼠肾间质纤维化的模型[1]。假手术组开腹后，只游离左侧肾脏及输尿管，但不结扎，其余步骤同模型组。5组动物分别于术后第3、7、14天各取5只处死取左肾；②分组：75只清洁级大鼠，用单侧输尿管梗阻（UUO）模型，随机分为五组：A假手术组、B模型组、C厄贝沙坦组、D肾康冲剂组、E厄贝沙坦加肾康冲剂组，每组15只，治疗组在单侧输尿管结扎（UUO）基础上给予肾康冲剂（300mg，kg-1，d-1）　厄贝沙坦粉末（10mg，kg-1，d-1）灌胃治疗，每天一次；模型组在UUO基础上给予生理盐水灌胃治疗，对照组不结扎输尿管外，其余同模型组。 　　1.2　主要试剂：：肾康冲剂　（西安国泰药业有限公司生产。批号：011001）；）兔抗大鼠TGF-β1 多克隆抗体、兔抗人NF-KBP65多克隆抗体和小鼠抗大鼠平滑肌肌动蛋白均购于santa　crul　，羊抗免IgG购于北京中山公司，SP试剂盒购于北京中山公司。 　　1.3　实验方法 　　1.3.1　肾组织病理学观察：取FAA固定的肾组织，酒精梯度脱水，石蜡包埋，制成2um厚石蜡切片，行HE及Masson染色，观察肾间质病变情况，肾小管间质损害程度按Mezzano方法进行分级。 　　1.3.2　免疫组织化学染色：NF-　?B，TGF-β1　，α-SMA，均采用SP法，取4um厚的10％中性福尔马林固定，石蜡切片，常规脱蜡，浸入3％H2O25min（去除内源性过氧化氢酶活性）。PBS缓冲液（PH＝7.4）冲洗3次，每次5分钟。正常山羊血清封闭。滴加稀释的一抗（NF-?B，TGF-β1，α-SMA均为1：100稀释液）。滴加适量抗体山羊抗免IgG。滴加SP试剂，PBS洗3次。DAB显色，苏木素复染3分钟。脱水，透明封片。镜检肾实质及间质细胞浆内棕褐色颗粒为阳性。 　　1.3.3　肾组织半定量分析：选择DAB染色阳性的石蜡切片进行病理图象分析：在200倍高倍镜下，每张切片任意选取5个不含肾小球的肾皮质视野，采用IMS-2000病理图象分析系统软件（华中理工大学自动研究所）计算每个视野的阳性面积占该视野面积的比值，然后取其平均值作为该切片的阳性面积比率，用%表示。 　　1.3.4　肾间质胶原蛋白含量的测定：肾间质胶原蛋白含量的测定，即氯胺T法，用紫外可见分光光度计560nm波长下比色，根据羟脯氨酸含量换算出肾组织胶原蛋白含量，并计算出胶原（ug）/肾重mg）之比。 　　2　结果 　　肾组织病理学改变光镜下通过HE、Masson染色观察假手术组从第3天至第14天肾组织病理未见明显改变。模型组光镜下术后第3天开始出现肾间质水肿，单核细胞浸润。术后第7天肾小管明显扩张，肾间质大量局灶炎性细胞浸润，管腔内可见脱落上皮细胞，术后第