Hippo—YAP信号通路在人膝骨性关节炎中表达的意义.docVIP

Hippo—YAP信号通路在人膝骨性关节炎中表达的意义 　　【摘要】 目的 探讨HippoYAP信号通路在膝骨关节炎中的作用及其意义。方法 研究对象包括膝骨关节炎患者71例，正常人28例，应用ELISA测定YAP和BLC2在关节滑液中的表达程度。结果 实验组与对照组的滑液中YAP与BCL2的表达水平作单因素方差分析，结果见表1。YAP的实验组与对照组比较差异有统计学意义P001，KOA患者的滑液中YAP的水平显著高于对照组。BCL2的实验组与对照组比较差异有统计学意义P001，KOA患者的滑液中BCL2的水平显著低于对照组。实验组中YAP与BCL2水平作Spearman相关分析，相关系数为r=0921（P001），两者呈正相关。结论 HippoYAP信号通路可能是软骨细胞的抗凋亡过程，深入探讨HippoYAP信号通路在骨关节炎中的各种促进机制将有可能建立骨关节炎新的治疗靶点。 　　【关键词】 　　膝骨关节炎；关节滑液；HippoYAP信号通路；凋亡 　　膝骨关节炎（Knee Osteoarthritis，KOA）是一种常见的关节软骨退变疾病，其主要表现为关节疼痛、晨僵、肿胀和进行性致畸。KOA的病变主要在于软骨的退行性改变，而软骨的退行性改变受各种细胞信号通路及因子的调控，其中HippoYAP信号通路是近年来研究的热点。目前的研究表明，Hippo通路的发现源自于1995年果蝇基因突变表型Wts，2002年发现了Hippo通路的三个成员：Salvador、YAP和Mats[1]。目前的研究证明[2]，Hippo信号通路是一条较为保守的信号通路，另外有研究证明[3]Hippo信号通路可以调节细胞的增殖和凋亡，检索国内外文献均为发现Hippo信号通路在骨关节炎中的研究报道。本文将通过探讨骨关节炎与Hippo信号通路的关系，了解Hippo信号通路在骨关节炎发病中的相关机制，为骨关节炎的早期诊断和病情判断提供临床实验数据，并且为进一步的治疗和预防提供理论依据。 　　1 资料与方法 　　1.1 实验对象 ①病例选择：所有研究对象均来自2010年2月至2012年8月韶关市第一人民医院骨科。实验组膝关节KOA患者71例，女32，男39例，平均年龄（67±12）岁（43～79岁），以上所有患者均经过临床及关节镜确诊，并且符合1991年美国风湿协会制定的Altman诊断标准。对照组为我院健康体检者29例，无KOA病史，膝关节透视检查正常，女13例，男16例，平均年龄（45±26）岁（26～78岁）。所有试验对象均在行关节镜检查前行关节穿刺，并与其签署知情同意书。②实验标本：两组的滑液均在行膝关节腔穿刺时留取，在抽取关节滑液时，先用1 ml的生理盐水冲洗关节腔，待冲洗完全后抽取1.5 ml。留取的关节滑液标本均离心后取上清，置于20℃冰箱保存备用。 　　1.2 材料和方法 ①主要仪器：普通冰箱（中国海尔），HHW电热恒温水浴箱（金坛市医疗器械厂），ELX800酶标分析仪（美国BioTec公司）。②主要试剂： HippoYAP抗体试剂盒购自Abcam公司，编号：ab124474。抑制凋亡蛋白BCL2抗体试剂盒购自上海恒斐生物科技有限公司，编号：BY5134R。③ELISA试验方法：将96孔板最上面一排的8孔作为标准孔，反复对倍稀释各孔，最后一个孔作为空白孔，建立标准曲线；加入待测样品100 μl，37℃反应90 min；001 m PBS洗板三次，滤纸印干；加入HippoYAP1（BCL2）一抗100 μl，37℃反应60 min；001 m PBS洗板三次，每次浸泡三分钟，滤纸印干；加入酶标液100 μl，37℃反应30 min；001 m PBS洗板五次，每次浸泡两分钟，滤纸印干；加入底物TMB90 μl，置37℃暗处反应5～10 min；每孔加入一滴终止液混匀，当蓝色转为黄色时上机检测；酶标仪设定450nm处测定吸光值。 　　1.3 统计学方法 所有数据均输入计算机，用SPSS 190版本软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差表示，以P005确定为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　实验组与对照组的滑液中YAP与BCL2的表达水平作单因素方差分析，结果见表1。YAP的实验组与对照组比较有统计学意义P001，KOA患者的滑液中YAP的水平显著高于对照组。BCL2的实验组与对照组比较有统计学意义P001，KOA患者的滑液中BCL2的水平显著低于对照组。 　　实验组中YAP与BCL2水平作Spearman相关分析，相关系数为r=0921（P001），两者呈正相关。 　　3 讨论 　　膝骨关节炎在中老年人疾病中较为常见，其发病原因与关节软骨细胞的退变、凋亡有关，软骨细胞在骨关节炎的发病过程中的变化受内环境中各种细