两种多孔生物玻璃支架材料的体外细胞相容性研究.docVIP

两种多孔生物玻璃支架材料的体外细胞相容性研究 　　[摘要] 目的 对比研究采用同样原料但以不同方法制备的两种多孔生物玻璃支架材料的体外细胞相容性。方法 溶胶-凝胶法制备A/W生物活性微晶玻璃（4006材料），熔融法制备多孔生物活性玻璃（45S5材料）。体外诱导分离培养及鉴定兔骨髓基质细胞（BMSCs），通过材料浸提液细胞毒性实验（MTT法）、细胞黏附实验、倒置相差显微镜、扫描 　　电镜和环境扫描电镜比较4006材料和45S5材料对BMSCs细胞黏附和生长的影响，并探索与材料复合的最佳BMSCs细胞悬液浓度。结果 4006材料浸提液培养1 d时，其细胞活力与纯培养液间无统计学差异（P0.05）；但培养3 d后， 　　其细胞活力低于纯培养液（P0.01）。45S5材料浸提液培养的细胞活力明显低于纯培养液（P0.01）。细胞与材料复合培养后，镜下见BMSCs在4006材料孔隙内贴壁生长良好，分泌基质活跃；而在45S5材料上细胞黏附生长较差。BMSCs与4006材料的黏附量随接种细胞浓度升高而升高，细胞悬液浓度为2×107 个·mL-1时的细胞黏附量最高。结论 溶胶-凝胶法制备的A/W生物活性微晶玻璃具有良好的生物活性和细胞相容性，具有作为骨组织工程支架材料的潜能。与其复合的细胞悬液浓度需要2×107 个·mL-1或以上。 　　[关键词] 骨组织工程； 支架； 生物活性微晶玻璃； 溶胶-凝胶法； 骨髓基质细胞； 细胞相容性 　　[中图分类号] R 318.08 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.03.019 　　随着组织工程学的发展，利用种子细胞和支架材料复合构建组织工程骨的方法，为骨缺损修复提供了一个崭新的思路。种子细胞培养与支架材料研制是组织工程学的两大核心环节。含有磷灰石（apa- 　　tite）和硅灰石（wollastonite）微晶相的生物陶瓷材料被命名为A/W生物活性微晶玻璃（apatite/wollastonite bioactive glass-ceramic，A/W BGC），这种材料在保持了良好生物活性的同时，其力学性能也接近于自然骨[1]。A/W BGC的制备及其作为骨组织工程中细 　　胞支架材料的研究，目前国内外尚处于起步阶段[2-3]。 　　A/W BGC中基础玻璃的制备方法包括传统的熔融法和新的溶胶-凝胶法两种，其中溶胶-凝胶法得到的生物玻璃具有更大的比表面积，能够为含碳羟磷灰石的形成提供更多的Si-OH成核位置点，提高微晶玻璃的生物活性，且溶胶-凝胶法制备的生物玻璃中的Ca2+比熔融法制备的更容易溶解[4]。溶胶-凝胶法制备的A/W BGC是否更适合组织工程的要求，目前尚无定论。 　　本研究通过体外实验对比研究原料同组分的溶胶-凝胶法制备的A/W BGC玻璃和传统熔融法制备的多孔生物活性玻璃的细胞相容性。从材料浸提液细胞毒性、材料与细胞的复合、倒置相差显微镜、扫描电镜（scanning electron microscope，SEM）和环境扫描电镜（environmental scanning electron micros-cope，ESEM）观察等方面，评价两种多孔生物玻璃 　　支架材料的细胞相容性，预测其作为骨组织工程支架材料的可行性。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验动物、材料及设备 　　3月龄新西兰实验兔1只，体质量2.1 kg，雌性，健康，无骨骼系统及内分泌系统疾病（普通级实验 　　动物，上海交通大学医学院动物中心提供）。 　　戊巴比妥钠（中国医药集团上海化学试剂公司 　　进口分装），肝素钠注射液（常州千红生化制药有限公司），DMEM（Gibco-BRL公司，美国），胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、维生素C（Hyclone公司，美国），胰蛋白酶、L-谷氨酰胺、地塞米松、β-磷酸甘油钠、青霉素、链霉素、MTT粉（Sigma公司， 　　美国），碱性磷酸酶试剂盒（上海放射免疫分析技术研究有限公司）。 　　恒温二氧化碳细胞培养箱（Hera公司，德国）， 　　倒置相差显微镜及照相系统（SS-325型，Tomy公司，日本），酶联免疫分析仪（BP800型，Bioht公司，芬 　　兰），环境扫描电镜（QUANTA-200型，Philips公司，荷兰）。 　　1.2 多孔生物材料的制备与检测 　　由同济大学材料学院用同样组分[MgCO3、CaCO3、NH3·H2O、SiO2、C2H5OH、Ca（H2PO4）2·H2O、CaF2、 　　Ca（NO3）2·4H2O、Mg（NO3）2·6H2O、HCl等]的原料，采用溶胶-凝胶法制备新型多孔A/W BGC（4006材 　　料），孔隙率为70%以上，