Survivin、Bcl—2、Pml的基因表达及其与鼻咽癌临床分期及预后的关系.docVIP

Survivin、Bcl—2、Pml的基因表达及其与鼻咽癌临床分期及预后的关系 　　[摘要] 目的 探讨鼻咽癌（NPC）患者Survivin、Bcl-2、Pml基因的表达情况，分析其与NPC临床分期及预后的关系。 方法 选取2010年1月～2012年5月本院与合作医院耳鼻喉科门诊收治的55例NPC患者和50鼻咽慢性炎症患者，将其作为临床研究对象。采用实时荧光定量PCR检测组织和外周血中Survivin、Bcl-2和Pml mRNA的表达，同时利用TUNEL法检测细胞的凋亡情况。 结果 NPC患者Survivin、Bcl-2、Pml基因表达阳性率分别为68.00%、74.00%、60.00%，均明显高于对照组；Ⅰ、Ⅱ期NPC患者Survivin、Bcl-2基因表达阳性率明显低于Ⅲ、Ⅳ期NPC患者，而Pml基因表达阳性率则明显高于Ⅲ、Ⅳ期NPC者；Survivin、Bcl-2、Pml阳性率患者放疗后1年后的生存率明显低于6个月后，差异具有统计学意义（P 0.05）。 结论 NPC患者Survivin、Bcl-2和Pml基因表达呈高阳性率，且Survivin、Bcl-2、Pml基因的表达与临床分期和预后存在密切的相关性，临床上可作为预测NPC放射敏感性和预后的有效指标。 　　[关键词] 鼻咽癌；Survivin；Bcl-2；Pml；临床分期；预后 　　[中图分类号] R739.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）06（a）-0017-03 　　近年来，我国鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）的发病率呈不断上升的趋势，死亡率较高，成为威胁人类健康的重要恶性肿瘤之一。目前，临床上对NPC的发病机制还不是很清楚，对NPC的特异性治疗也不是很明确，正处于不断的研究中，故对NPC发病机制及治疗方案的研究显得尤为重要。有研究显示，NPC的发生具有较为明显的遗传特性，常表现为家族性遗传，遗传因素是影响NPC发生的较为重要的因素[1-2]。多数研究认为NPC的发生与多种癌基因、抑癌基因的改变相关，如Survivin、Bcl-2、Pml基因的表达与NPC的发生关系密切[3-5]。本研究针对NPC患者Survivin、Bcl-2和Pml基因表达情况进行探究，现将结果报道如下： 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取2010年1月～2012年5月本院与合作医院耳鼻喉科门诊收治的55例NPC患者和50例鼻咽慢性炎症患者，将其作为临床研究对象。NPC患者中，男19例，女36例，年龄20～75岁，平均（45.5±5.6）岁，其中，早期癌（Ⅰ、Ⅱ期）患者20例，晚期癌（Ⅲ、Ⅳ期）患者30例。鼻咽慢性炎症患者中，男15例，女35例，年龄19～77岁，平均（46.4±5.8）岁。NPC的临床分期及病理诊断标准均符合中国1992 NPC分期标准。两组患者在性别、年龄等方面差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。 　　1.2 方法 　　采用免疫组化SP法检测Survivin、Bcl-2和Pml在组织中的表达情况，将NPC和鼻咽慢性炎症患者的组织标本经石蜡常规切片成4～5 μm后裱在用多聚赖氨酸涂好的玻片上，70℃下烤24 h后，切片脱蜡、水化后，再采取柠檬酸缓冲液微波法修复抗原，采取三步法步骤对Survivin、Bcl-2及Pml单抗进行组织化学染色，同时采用3，3-二氨基联苯胺（DAB）酶底物进行显色。Survivin、Bcl-2及Pml单抗及免疫组织化学所用试剂由北京中杉广州分公司提供。同时利用TUNEL法[3]检测细胞的凋亡情况，TUNEL法为采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导dUTP缺口末端标记，实验以不含TdT的标记液代替TUNEL反应液作阴性对照。末端标记检测试剂盒为德国Roche Molecular Biochemicals公司产品，凋亡的原位检测采用TUNEL染色法按照试剂盒说明进行。NPC患者均采取放疗治疗，治疗后随访患者1年。 　　1.3 观察指标 　　观察NPC患者及鼻咽慢性炎症患者Survivin、Bcl-2、Pml基因的表达情况，同时比较不同临床分期NPC患者Survivin、Bcl-2、Pml基因的表达情况。以高倍镜视野下计数，以细胞浆或细胞核内有棕黄色、黄色颗粒或斑片的细胞为阳性细胞。Survivin、Bcl-2、Pml的评定标准为：癌细胞阳性的百分数≤5%为（-），6%～25%为弱（+），25%为（+）。调查记录NPC患者6个月后、1年后的肿瘤复发及生存率情况。 　　1.4 统计学方法 　　应用SPSS 17.0统计软件对本次研究所取得的数据进行分析，计数资料采用χ2检验，以P 0.05为差异有统计学意义。 　　2