气相色谱法测定鱼油保健品中EPA和DHA.docVIP

气相色谱法测定鱼油保健品中EPA和DHA 　　【摘 要】建立了气相色谱法测定市场上不同厂家鱼油制品中EPA和DHA含量的方法。采用皂化反应-甲酯化反应对样品进行前处理，用外标法进行定量测定。EPA和DHA在0.03mg/ml～0.5mg/ml范围内线性关系良好（γ=0.9996，0.9991），回收率在98.6%～99.8%之间。该方法操作简单、快速，结果可靠，重现性好，可作为鱼油制品质量评价的参考依据。 　　【关键词】气相色谱法；EPA；DHA；皂化反应-甲酯化反应 　　【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）02-0722-01 　　长链多不饱和脂肪酸（LC-PUFA），是细胞膜的重要组成材料，对中枢神经和视网膜的发育及维持其正常生理功能具有相当重要的作用。鱼油中富含LC-PUFA，尤其是其中所含的二十碳五烯酸（C20：5ω3， EPA）和二十二碳六烯酸（C22：6ω3， DHA）被称为脑黄金，是在其它油脂中难以见到的。EPA和DHA的含量是决定鱼油保健品价格的主要因素，因此研究测定EPA和DHA的测定方法十分必要。已有文献报道EPA和DHA的测定方法[1]，本文对样品进行皂化反应-甲酯化反应，建立了简便，快速准确的GC检测方法。 　　1 实验部分 　　1.1 仪器与试剂 　　Agilent 6890（美国）；标准品：EPA甲酯（货号：C100MGU-99-M），DHA甲酯（货号：C100MGU-84-M）；正己烷，甲醇均为色谱纯（德国Merck公司）；水为二次蒸馏水。 　　标准储备液：准确称取EPA甲酯和DHA甲酯各0.1g置100ml容量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度。 　　1.2 分析条件 　　1.2.1 色谱条件 　　色谱柱：HP-FFAP弹性石英毛细管柱（30m?0.53mm?1.00μm）；柱温：200℃；进样口温度：230℃；检测器温度：230℃。载气及流速：高纯氮气，纯度≥99.999%，6.0ml/min；分流比：5：1；进样量：1μl。 　　1.2.2 样品处理 　　取样品5-10粒，内容物混匀，精密称取约0.2g适量置100ml容量瓶中，加适量正己烷溶解，加入2mol/L氢氧化钠-甲醇溶液2ml，充分震荡10min，放入60℃的水浴中加热2min，冷却至室温，再加入2mol/L盐酸-甲醇溶液4ml，充分震荡10min，放入60℃的水浴中加热2min，弃去下层溶液，再加2ml蒸馏水洗净并去除水层，吸出正己烷至装有无水硫酸钠的漏斗中脱水，将脱水后的溶液定溶至100ml容量瓶中，作为供试品溶液。 　　2 结果与讨论 　　2.1 样品处理方法的优化 　　在对油脂中的EPA和DHA分析过程中发现，油脂中的脂肪酸以脂肪酸甘油酯的形式存在，但其沸点很高，不利于色谱分析。由于脂肪酸甲酯的挥发性较高能够保证优良的色谱峰形，便于色谱分析，因此采用甲酯化方法将甘油酯转化为甲酯。酯化方法的选择对于分析结果的影响使明显的，有文献报道对鱼油制品直接测定或用氢氧化钾-甲醇直接甲酯化[2，3]，试验发现这两种方法的测定结果偏低且回收率低。先用氢氧化钠-甲醇溶液进行皂化反应，再用盐酸-甲醇溶液进行甲酯化反应，测定结果较高，用水净化并用无水硫酸钠脱水后，溶液pH接近中性，可延长色谱柱的寿命，且能避免色谱峰拖尾。样品图谱见图1. 　　2.2 色谱条件的优化 　　试验发现柱温对EPA甲酯和DHA甲酯的保留时间影响很大，当柱温设为220℃，保留时间依次为4.2min和7.8min，但与相邻杂质峰均不能完全分开；柱温设为200℃时，EPA甲酯和DHA甲酯均与相邻杂质峰完全分开。 　　2.3 线性范围及检出限 　　取1.1项下标准储备液，依次量取0.3ml，1ml，3ml和5ml置10ml容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，分别进样1μl，绘制标准曲线。以峰面积对质量浓度进行线性回归，EPA甲酯和DHA甲酯线性方程依次为A=5847.4C-46.358，γ=0.9996；A=5011.8C+24.364，γ=0.9991，表明在0.03mg/ml～0.5mg/ml范围内线性关系良好。根据3倍信噪比计算检出限依次为0.3μg/ml和0.4μg/ml。 　　2.4 重复性和稳定性 　　按2.1项下方法处理样品（×××牌鱼油软胶囊），平行处理6份，计算EPA和DHA的含量，RSD依次为1.0%和1.2%，说明色谱系统重复性良好。取重复性试验的同一份供试品溶液，常温下放置0，2，4，8h进样分析，记录峰面积，RSD为2.1%，表明供试品溶液稳定性良好。 　　2.5 回收率 　　以加标回收率试验考察方法的准确性。按2.1项下方法处理样品（×××牌鱼油软胶囊），分别加入标准溶液适量，用外标