第六章吸光光度法精选.ppt

第六章 吸光光度法 6.1 吸光光度法的基本原理 6.1.1 光的基本性质 6.1.2 物质对光的吸收 6.1.3 吸光光度法的特点 6.4 显色反应 6.1 吸光光度法的基本原理 6.1.1 光的基本性质 2.光的波粒二象性 3.单色光、复合光、光的互补 6.1.2 物质对光的吸收 2.光吸收的原理 如测量某种物质对不同波长单色光的吸收程度，以 波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，可得到一条曲 线，称为吸收曲线或吸收光谱 。 3.定性分析与定量分析的基础 6.1.3吸光光度法的特点 较高的灵敏度 适当的准确度；(2%-5%) 应用范围广； 简便，易于操作； 6.2分光光度法的基本原理 6.2.1光吸收的基本定律 吸光度 与透光率 3.吸光度的加合性 （1）在同一波长下，不同物质的吸收 （2）在不同波长下，同一物质的吸收 6.2.2吸光光度法的灵敏度 2.摩尔吸光系数ε的讨论 （1）吸收物质在一定波长和溶剂，温度条件下的特征常数 （2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。 （3）对同一种待测物质，不同的方法具有不同的 ? ，表明具有不同的灵敏度。 例：分光光度法测铜 铜试剂法测 Cu ? 426 = 1.28 ? 104 L·mol-1·cm-1 双硫腙法测 Cu ? 495 = 1.58 ? 105 L·mol-1·cm-1 3、桑德尔指数 S S 值表示： 截面积为1 cm2的液层，在一定波长或波段处测得的吸光度A为0.001时，所含待测物质质量，单位为 ?g ．cm-2。 Sandell 灵敏度与? 的关系: 6.3 吸光分析方法 6.3.2 吸光光度法 用纯度较高的单色光照射被测溶液，测量 其对光的吸收情况，再根据朗伯-比耳定律计算 。准确度、灵敏度较目视比色法提高很多；其 所用仪器称为分光光度计。 (二）单波长单光束分光光度计 （三）单波长双光束分光光度计 6.4.1 显色剂的选择 显色反应的的灵敏度高； 高选择性； 稳定性好，组成恒定； MR（有色化合物）与R（显色剂）颜色差别较大，即对照性要大，一般要求两者的吸收峰波长之差 △λ＞60nm。 显色条件易于控制； 三、显色时间 实际工作中，作 A ~ t 曲线，寻找适宜 反应时间。 四、温度 五、溶剂 六、干扰物质 干扰物质本身有颜色、与显色剂反应、与被测离子反应、以及本身的沉淀和水解反应等，均会干扰测定。 消除措施：控制酸度、掩蔽、萃取和其他物理分离法，也可选择适当的测定波长。 6.5 光度测量的条件选择 6.5.3 参比液的选择 参比溶液的选择一般遵循以下原则： 6.6.1偏离朗伯—比耳定律的原因 依据Beer定律，A与C关系应为经过原点的直线 偏离Beer定律的主要因素表现为以下两个方面 （一）光学因素 （二）化学因素 （一）光学因素 1．非单色光的影响： Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度 讨论： 入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 结论： 选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑） 选λmax作为测定波长（Δ ↓，S↑且成线性） 2．杂散光的影响： 杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度 范围内，与所选波长相距较远 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值 3．反射光和散色光的影响： 反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光 直接对T产生影响 散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形 注：一般可用空白对比校正消除 4．非平行光的影响： 使光程↑，A↑，吸收光谱变形 （二）化学因素 Beer定律适用的另一个前提：稀溶液 浓度过高会使C与A关系偏离定律 6.7 吸光光度法应用 6.7.2 示差光度法 示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。 由标准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶 液浓度cx： cx =cs + Δc 示差法标尺扩展原理 普通法： cs的T=10%；cx的T=5% 示差法： cs 做参比，调T=100% 则： cx的T=50% ；标尺扩展10倍 6.1了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系。吸收曲线—定性分