安农大 微生物工程 复习.doc

第三代微生物发酵技术——微生物工程：是以微生物为主体，应用生物科学，特别是微生物学的理论和方法，结合现代工程技术手段，利用微生物的某种特定性状和功能，按照人们设计的蓝图，改良、加工、繁殖微生物，以获取微生物体本身或其代谢产物等有用物质，为人类生产、生活为目的的一门新兴学科。 微生物工程的应用： 1.微生物工程在食品工业中的应用：包括传统的含醇饮料、调味品、乳制品等，至今其产量和产值还占生物技术的首位。 含醇饮料：葡萄酒、果酒、黄酒、白酒、啤酒、白兰地、威士忌、伏特加等。 传统调味品及发酵食品：酱、酱油、醋、豆鼓、豆腐乳、饴糖、泡菜等。 发酵乳制品：奶酒、干酪、酸奶等； 2.微生物工程在医药卫生中的应用：抗生素、氨基酸、维生素、甾体激素、生物制品、治疗用酶、酶抑制剂。 半合成抗生素：某些天然抗生素在去侧链后，可用化学合成法接上新的侧链而改变原有抗菌谱或其它特性，这样的抗生素就被称为半合成抗生素。 常用的半合成抗生素：青霉素型和头孢菌素型。 常用的半合成青霉素：甲氧苯青霉素（新青Ⅰ）、乙氧萘青霉素（新青Ⅱ）、苯唑青霉素（新青Ⅲ）、氨苄青霉素、羟氨苄青霉索等。 3.微生物工程在轻工业中的应用：主要是用于轻工业及其食品工业中的酶：糖酶、蛋白酶、果胶酶、脂肪酶、凝乳酶、过氧化氢酶。 4.微生物工程在化工能源产品中的应用： 利用发酵、生物转化或酶法生产下列产品：烷烃、醇及溶剂、有机酸、多糖、清洁能源。 5.微生物工程在农业中的应用：生物农药、生物除草剂、生物增产剂、食用菌和药用真菌。 6.微生物工程在环境保护中的应用：厌气发酵法、好气发酵法。 7.微生物工程在细菌冶金中的应用： 8.微生物工程在高技术研究中的应用：如基因工程中用的限制性内切酶、连结酶、DNA探针等；生物芯片(blochip）等。 第二代微生物发酵技术——深层培养技术（deep culture）、 沉没培养法、液体培养法。在深层的液体培养中进行的一种发酵培养方法。操作时将无菌空气通入容器中，不断搅拌，使微生物充分与氧气接触而迅速繁殖。占地面积小，劳动力省，产量高，适合于机械化和自动化生产。适用于需氧性微生物。 微生物工程的工业生产三个要素：生产菌种的性能、发酵及提纯工艺条件、生产设备。其中优良的菌种是最重要的。 一般菌种分离纯化和筛选步骤如下： 标本采集→标本材料的预处理→富集培养→菌种初筛→菌种复筛→性能鉴定→菌种保藏。 标本的预处理方法： （1）采用热处理方法减少材料中的细菌数 ：放线菌的繁殖体、孢子和菌丝片段。 （2）采用膜过滤和离心的方法浓缩水中的细胞。 （3）采用化学方法。 （4）诱饵法：将固体基质等加到待检的土壤或水中，待其菌落长出后再铺平板分离。 （5）空气搅拌法 ：在空气中搅拌，收集孢子沉淀，如稻草的处理。 菌种的分离： （1）施加选择性压力分离法：利用不同种类的微生物对环境和营养要求的不同，人为控制这些条件，使之利于某类或某种微生物的生长，而不利于其他种类微生物的生存，以达到使目的菌种占优势，而得以快速分离纯化的目的。 分离培养基的效率取决于其养分，pH和加入的选择性抑制剂等。 培养方法：液体培养方法和固体培养方法。 固体培养方法：固体培养基常用于分离某些酶产生菌，其选择培养基中常含有所需酶的基质，以便促进酶产生菌的生长。 液体培养方法：摇瓶培养（分批式富集培养），连续培养（恒化式富集培养）。 （2） 随机分离方法：抗生素产生菌的分离、抗肿瘤药物产生菌的分离、酶抑制剂产生菌的分离、生长因子产生菌的分离、多糖产生菌的分离。 菌种选育方法： 自然选育+人工选育：诱变、杂交、原生质体融合、基因工程。 自然选育的优点：简单易行，并可以达到纯化菌种、防止菌种衰退、稳定生产、提高产量的目的。 缺点：效率低、进展慢。 诱变育种的基本过程：选择合适的出发菌株→制备待处理的菌悬液→诱变处理→筛选→保藏和扩大试验。 出发菌株应具备： （1）对诱变剂的敏感性高；（2）具有特定生产性状的能力或潜力。 出发菌株的来源： （1）自然界直接分离到的野生型菌株； （2）历经生产考验的菌株； （3）已经历多次育种处理的菌株。 制备细胞悬液： 要求：（1）菌体处于对数生长期，并使细胞处于同步生长； （2）细胞分散且为单细胞，以避免表型迟延现象（phenotypic lag）； 诱变剂的作用：（1）提高突变的频率；（2）扩大产量变异的幅度；（3）使产量变异朝着正突变或负突变移动。 杂交育种指将两个基因型不同的菌株经吻合或接合，使遗传物质重新组合，从中分离和筛选具有新性状的菌株。 1.细菌杂交：细菌的杂交可以通过细菌接合、F因子转导、R因子转移、转化和转导等发生基因重组。 普遍性转导，双交换形成转导子。 2.放线菌的杂交育种： （1）放线菌的杂交原理：包括四种遗