实验9_DNA的含量测定2.pptVIP

实验九 核酸的定量测定 实验目的 1、掌握二苯胺法测定DNA含量的原理以及操作步骤。 2、熟悉紫外法测定DNA含量。 一、相关理论 核酸含量测定的方法： 1、常用方法有：紫外分光光度法、电泳法。 2、化学检测法：定磷法、二苯胺法、地衣酚法。 DNA的结构 二、原理 DNA的α-脱氧核糖在酸性条件下转变成ω-羟基-γ酮基戊醛,与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸收，蓝色化合物的吸光度值与DNA含量成正比（ DNA含量在40～400 ug/mL浓度范围内）。 三、试剂和器材 1. 试剂 DNA标准溶液（200mg/mL）、二苯胺试剂 2. 器材 紫外-可见分光光度计、恒温水浴锅。 2. 样品的测定 ⑵ 通过稀释后测得A值，可以大致估算出样品中DNA的含量（吸光度A值为1相当于50μg/mL DNA）。 ⑶ 样品稀释到合适的倍数时，可以同时测A280的值。以A260/A280的值判断样品DNA的纯度。 A260/A280 1.8～1.9 DNA纯度高 1.9 有RNA污染 1.8 有蛋白污染 ⑷ 取稀释好的样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇