实验十一 PCR实验.PPTVIP

实验目的 掌握PCR反应的原理及技术。 掌握PCR反应的操作方法。 实验原理 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）简称PCR技术，是一种体外扩增特异DNA片段的技术。 利用PCR技术可在短时间内获得数百万个特异的DNA序列的拷贝。PCR技术在分子克隆、遗传病的基因诊断等方面得到广泛的应用。 PCR技术实际上是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。 PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。 实验仪器、材料与试剂 （一）仪器 1. PCR仪 2. 台式离心机 3. 微量取液器 （二）材料 模板DNA 引物：APO A1-GST2(载体：pGEX-6P-1) PrimerGST6p1-APOA1-Up: 5’ GGAATTCATGGATGAACCCCCCCAGAGCC -3’ EcoRI PrimerGST6p1-APOA1-down: 5’ CGCGTCGACTCA CTG GGT GTT GAG CTT CT-3’ SalI （三）试剂 1. 10x PCR buffer 2. dNTPs 2.5mM 3. Taq 酶 5u/μl 4. 引物1和2( 2μmol/L) 5. 模板 实验步骤 1. 在0.2ml